Experimentos para explorar cambios en las cifras de población de levaduras

Los experimentos para explorar los cambios en la población de levaduras son los siguientes:

La levadura es una bacteria de ingeniería alimentaria comúnmente utilizada en la elaboración de cerveza y en la pasta inflada. Después de ingresar a un nuevo entorno cultural, ¿qué reglas seguirá la población de levaduras? En este experimento, utilizamos un hemocitómetro para estimar la densidad de población de levadura en el medio de cultivo, calcular el número de población y explorar los cambios en el número de poblaciones de levadura en el medio de cultivo en 7 días.

Materiales y utensilios:

Levadura de ángel en polvo, patatas, sacarosa, balanza, agua destilada, matraz Erlenmeyer de 50 mL, tapón de algodón, vaso de precipitado de 500 mL, probeta medidora, gasa, gasa de alta presión. extintor de vapor a presión Olla para bacterias, lámpara de alcohol, incubadora a temperatura constante, refrigerador, gotero, solución de azul de metileno al 0,2%, tablero para contar células sanguíneas, microscopio, etc.

Patata mediana: Se hierven 100 g de patatas y 10 g de sacarosa en agua durante 15 minutos. Después de filtrar con una gasa, se añade agua para ajustar el volumen a 500 mL. Utilice una probeta medidora para distribuir en siete matraces Erlenmeyer de 50 ml, tápelos con tapones de algodón, séllelos con periódicos viejos e hilo de algodón y esterilícelos con vapor a alta presión para su uso posterior.

Solución de azul de metileno al 0,2%: 0,2 g de azul de metileno en polvo disueltos en 100 mL de agua destilada.

Pasos:

1. Cultivo de levadura.

Diariamente inocular un frasco de medio de cultivo con 0,25g de levadura seca en polvo junto a una lámpara de alcohol con una masa igual de inoculación estéril. La densidad de inoculación es de unas 6×107 células/mL. De esta manera, las densidades de población iniciales en los siete medios de cultivo son básicamente las mismas.

Luego, el medio de cultivo inoculado se colocó en una incubadora a temperatura constante a 30°C para su cultivo. Después de siete días, la levadura cultivada el primer día se cultivó durante 7 días y la levadura se cultivó el séptimo. día solo se cultivó durante 1 día (Figura 1). Una vez completado el cultivo, almacene todos los medios de cultivo a una temperatura baja de 4°C. A esta temperatura, la levadura dejará de crecer y no morirá en un corto período de tiempo.

2. Dilución y tinción del medio de cultivo.

Antes del experimento, agregue 1 mL de solución de cultivo agitada al matraz Erlenmeyer que ya contiene 48 mL de agua destilada y luego agregue 1 mL de solución acuosa de azul de metileno al 0,2 para diluir la solución de cultivo original 50 veces. El azul de metileno puede teñir de azul las células muertas, pero las células vivas no, y puede ayudarnos a distinguir las células muertas de las vivas bajo un microscopio.

3. Utilice un hemocitómetro para contar.

El tablero de conteo de células sanguíneas es un portaobjetos de vidrio engrosado especialmente diseñado. El tablero de conteo está dividido en dos encimeras mediante una ranura guía en forma de "H" en el medio, y cada tablero tiene una cámara de conteo. Contando células de levadura u otras células en una cámara de recuento bajo un microscopio, se puede calcular la densidad de las células en la solución de cultivo original.

Primero cubra la cámara de conteo con un cubreobjetos especial para la placa de conteo, y la altura del líquido entre la cámara de conteo y el cubreobjetos es de 0,1 mm. Después de mezclar el líquido de cultivo que se va a contar con un gotero, extraiga el líquido de cultivo e inyéctelo desde la pendiente entre la cámara de conteo y el cubreobjetos.

El medio de cultivo se infiltrará en la cámara de recuento debido a la acción capilar. Cuando el medio de cultivo llene la cámara de recuento, la inyección se detendrá. Déjalo reposar un rato y espera a que las células se asienten, luego podrás observarlas bajo el microscopio.

Antes de observar, asegúrese de alinear la cámara de conteo con el orificio de la luz y cerrar la apertura al mínimo. Esto hace que sea más fácil encontrar los cuadrados de conteo.

Debajo de la lente 4x, ajuste el tornillo de enfoque para encontrar el cuadrado grande central y colóquelo en el centro del campo de visión. Luego cambie a la lente 10x. Puede ver que el cuadrado grande central. con una superficie de 1mm2 se divide en 25 Consta de una cuadrícula de cuadrado chino con doble borde.

Hay 16 cuadrados pequeños en cada cuadrado central, por lo que hay 400 cuadrados pequeños en un cuadrado central grande, y el área de cada cuadrado pequeño es 1/400 mm2, por lo que este es el origen de 25 y 1/400 mm2 en el tablero de conteo.

A continuación, utilice un microscopio de 40x para realizar un recuento de muestreo de cinco puntos de las células de levadura viables en los cuadrados superior izquierdo, superior derecho, inferior izquierdo, inferior derecho y central en el cuadrado grande central. Al contar, siga el principio de tomar las celdas por encima de la línea de presión pero sin bajarlas, y tomar las celdas de la izquierda pero no de la derecha.

Después de contar el número de celdas en los 5 cuadrados centrales designados, súmelos y divídalos por 5 para obtener el número promedio de celdas en cada cuadrado central. Multiplica por 25 para obtener el número de celdas en el cuadrado central.

Dividir por el volumen de medio de cultivo en el cuadrado grande da el número de células por milímetro cúbico. Dado que 1 ml equivale a 1000 mm3, multiplique por 1000 para obtener el número de células por mililitro de dilución. Multiplique por el factor de dilución registrado para obtener el número de células por mililitro de solución madre.

4. Procesamiento y análisis de datos.

Antes del experimento, los estudiantes de la clase se dividieron en 7 grupos. Cada grupo designó un líder de grupo que era responsable de recibir y distribuir el diluyente dentro del grupo dentro del tiempo especificado y encontrar. el promedio dentro del grupo, los datos que difieren en más de un orden de magnitud se descartan para reducir errores y luego se informan a toda la clase.

Con base en los datos resumidos, los estudiantes dibujarán una curva del cambio en la densidad de población de levadura en la solución de cultivo dentro de siete días (Figura 7), descubrirán sus reglas de cambio y utilizarán el conocimiento existente para explicarlo. razonablemente.