¿Cómo ampliar el cultivo de la especie madre Cordyceps militaris?
Debido a que el número de semillas madre es generalmente pequeño, no puede satisfacer las necesidades de cultivo. Hay que transferirlo y ampliarlo. El medio utilizado para la propagación puede ser el mismo que el agar integral de papa y glucosa (denominado medio integral PDA). También se pueden utilizar los siguientes medios de cultivo de fórmula. Los relativamente simples incluyen: 10 gramos de sacarosa, 10 gramos de peptona, 0,5 gramos de sulfato de magnesio, tabletas de vitamina B5, 15 gramos de agar y 1000 ml de agua. O utilice 30 gramos de sacarosa, 1 gramo de asparagina, 0,3 gramos de sulfato de hierro, 1,25 gramos de dihidrógenofosfato de potasio, 0,5 gramos de cloruro de potasio, 0,01 gramos de sulfato de hierro, 15 gramos de agar y 1000 ml de agua destilada. Usar después del autoclave.
La inoculación por transferencia es la operación más básica para cultivar materiales medicinales fúngicos. Debe realizarse en una habitación estéril o en un ambiente relativamente limpio, si hay una habitación estéril, puede encender la luz ultravioleta. durante 1 hora antes de la inoculación Disponible media hora después del cierre. El medio de cultivo y los utensilios de operación se colocan previamente en la sala estéril. El vacunador puede traer el cultivo madre. Lávese las manos antes de ingresar a la sala de inoculación, póngase ropa y sombreros limpios, preferiblemente esterilizados, y use zapatos especiales. En la habitación estéril, es mejor no salir a mitad de camino después de entrar. No volver a abrir la puerta de la sala estéril hasta que se complete todo el trabajo para evitar la entrada de bacterias externas.
La aguja de vacunación, pinzas, etc. utilizadas para la vacunación se pueden introducir en un frasco de boca ancha que contenga alcohol para su uso posterior. El personal utilizó 75 bolas de algodón con alcohol para limpiarse las manos y la pared exterior del tubo de ensayo bacteriano. Encienda la lámpara de alcohol, sostenga el tubo de semilla madre y el tubo de ensayo biselado uno al lado del otro con la mano izquierda, con el bisel hacia arriba para verlo fácilmente. Primero, afloje suavemente el tampón con la mano derecha. Luego sostenga la aguja de inoculación con la mano derecha y quémela en la lámpara de alcohol por un momento. La punta de la aguja debe estar al rojo vivo. Todas las demás partes que ingresan al tubo de ensayo también deben quemarse para esterilizarlas. Luego, sostenga dos tapones de algodón entre el dedo meñique de la mano derecha y el dedo meñique y anular, sáquelos con cuidado y queme las dos bocas de los tubos de ensayo en la llama con la mano izquierda. Luego queme la aguja de inoculación en la llama, extiéndala dentro de la pendiente del tubo de ensayo a inocular y déjela enfriar, luego extiéndala dentro del tubo de semilla madre original, extraiga un poco de micelio blanco (del tamaño de un grano de arroz). ), introducirlo en el tubo de ensayo a inocular, y colocarlo sobre el tubo de ensayo a inocular la parte central del talud es para facilitar el crecimiento y extensión de las hifas a su alrededor. Luego inserte el tampón. Esto completa el procedimiento de inoculación para el primer tubo. La acción de inoculación debe ser rápida. Al recibir el segundo tubo, la aguja de inoculación debe quemarse nuevamente en la llama antes de su uso. Después del trasplante, se coloca una etiqueta con el nombre de la bacteria, fecha de inoculación, etc. Generalmente, una cepa madre puede transferirse a más de 20 o incluso 40 nuevos biseles. Puedes hacer un manojo de 7 a 10 tallos, envolverlos en papel kraft y colocarlos a 20 a 25°C para su cultivo. El micelio cubrirá el talud en 10 a 14 días y tendrás una semilla madre secundaria. Se puede conservar como cepa pura. También se puede utilizar para producir cultivares.