¿Qué hace el Western Blot?

Western Blot generalmente se llama Western Blot en chino. Es un método experimental comúnmente utilizado en biología molecular, bioquímica e inmunogenética. El principio básico es teñir células o muestras de tejido biológico procesadas mediante electroforesis en gel mediante anticuerpos específicos. La información sobre la expresión de una proteína específica en las células o tejidos analizados se obtiene analizando la ubicación y profundidad de la tinción.

Western Blot utiliza electroforesis en gel de poliacrilamida. El objeto detectado es una proteína, la "sonda" es un anticuerpo y el "desarrollo de color" utiliza un anticuerpo secundario marcado. La muestra de proteína separada por PAGE se transfiere a un portador de fase sólida (como una membrana de nitrocelulosa). El portador de fase sólida absorbe la proteína en forma de enlaces no valentes y puede mantener el tipo de polipéptido separado por electroforesis y su biología. actividad sin cambios. La proteína o péptido en el portador de fase sólida se usa como antígeno, reacciona con el anticuerpo correspondiente y luego reacciona con la enzima o el segundo anticuerpo marcado con isótopos y luego detecta el propósito específico de la separación electroforética mediante el desarrollo del color del sustrato o la autorradiografía. Componentes proteicos de la expresión génica.

Los principales métodos de desarrollo del color mediante Western Blot son los siguientes:

i Autorradiografía

ii. ECL de quimioluminiscencia del sustrato

iii. Fluorescencia del sustrato ECF

iv. Desarrollo del color del sustrato DAB

Cabe mencionar que el origen del nombre western blot es muy interesante. La primera persona que realizó trabajos de transferencia fue un científico llamado Southern, pero el objeto de la impresión eran hebras de ADN. Llamó a esta técnica transferencia Southern. Más tarde, aparecieron dos métodos de impresión con procesos similares pero con objetos diferentes, uno para el ARN es un par de proteínas. La gente llama a estas dos tecnologías Norteña y Occidental respectivamente, lo que no tiene nada que ver con los inventores de estas dos tecnologías.