Principio de extracción de ARN
El principio de la extracción de ARN es utilizar una solución de Trizol para separar el ARN total del ADN y las proteínas. Trizol es una solución ácida que contiene tiocianato de guanidina (GITC), fenol y cloroformo. GITC desnaturaliza irreversiblemente las proteínas y la ARNasa. A esto le sigue la centrifugación. En condiciones ácidas, el ARN total permanece en la fase acuosa superior, mientras que la mayor parte del ADN y las proteínas permanecen en la fase media o fase orgánica inferior. Luego se recuperó el ARN total mediante precipitación con isopropanol. Las enzimas RNasa se pueden inactivar añadiendo carbonato de dietilpirrol (DEPC).
Al extraer ARN, agregue cloroformo y divídalo en tres capas: fase acuosa (que contiene ARN y posiblemente una pequeña cantidad de ADN), una fina capa blanca en el medio (debe ser proteína y ADN) y una fase orgánica inferior (cloroformo y proteína), etc.)
El cloroformo es un disolvente orgánico con un peso molecular relativamente grande. Al extraer ARN, el cloroformo puede separar eficazmente la fase orgánica y la fase inorgánica rápidamente. Durante el proceso de extracción de ADN, la combinación principal de fenol y proteína en la fase orgánica hace que la proteína y el ADN se separen, y el ADN ingresa a la fase acuosa. Sin embargo, durante el proceso de extracción de ARN, es necesario evitar la separación de proteínas y ADN, de lo contrario el ADN se liberará a la fase acuosa. Independientemente de si hay fenol o no, el cloroformo también tiene un efecto desnaturalizante sobre las proteínas. Una agitación violenta puede hacer que los grupos hidrofílicos del ADN entren en contacto con el agua. Así que no lo sacudas violentamente.
La función del alcohol isopropílico es proteger los grupos hidrófilos de la cadena de ARN o ADN mediante la interacción hidrófoba del -OH, lo que equivale a la precipitación, pero esta reacción se produce en fase acuosa, a diferencia de la anterior. El cloroformo no es inconsistente.
También existen muchos ARN pequeños de diferentes tipos y funciones en las células, como el ARNsn que forma el espliceosoma, el ARNsno que se encarga de la formación del ARNr y los miARN y ARNip que participan en el ARNi, que puede regular la expresión genética. Otros, como los intrones de tipo I y II, RNasaP, HDV, ARN ribosomal, etc., tienen todos la actividad de catalizar procesos de reacción bioquímica, es decir, tienen actividad enzimática. Este tipo de ARN se llama ribozima.
El ARN juega un papel vital en diversas actividades biológicas. La desoxirribosa no tiene 2'-OH. El O (átomo de oxígeno) en el 2'-OH del ARN puede estar cerca del grupo fosfato debajo del átomo de carbono 3' cuando el hidróxido (agua) y el hidrógeno se combinan para formar un fosfato. grupo que contiene 5** *P del enlace de valencia (5 P-O).
El ARN y el ADN son ácidos nucleicos, además de lípidos, proteínas y carbohidratos. El grupo hidroxilo unido al carbono 2 de la ribosa es una característica estructural importante del ARN. Este tipo de grupo hidroxilo hace que la estructura del ARN bicatenario sea la más cercana a la conformación de tipo A. Sin embargo, en el entorno de ciertos dinucleótidos en la cadena simple, es muy poco probable que se forme la conformación de hélice de tipo B, que. Es el ADN más común.