Pregúnteme: ¿Cómo elegir la fase móvil de HPLC?
Para columnas generales de fase reversa, utilice metanol/agua o acetonitrilo/agua como fase móvil.
Cuando se utiliza metanol/agua como fase móvil, si los picos en el cromatograma obtenido no están completamente separados, se puede aumentar la proporción de agua. Si el pico aparece demasiado tarde y el efecto de separación es bueno, se puede aumentar la proporción de metanol para que el pico aparezca antes. Para algunas sustancias que son difíciles de separar, se debe utilizar acetonitrilo/agua como fase móvil.
Al ser la fase móvil en cromatografía líquida de alta resolución un líquido, tiene afinidad por los componentes y participa en la competencia por los componentes de la fase fija. Por tanto, la correcta elección de la fase móvil incide directamente en la resolución de los componentes. Los requisitos para el disolvente de fase móvil son:
(1) El disolvente debe tener una polaridad adecuada y una buena selectividad para la muestra que se va a analizar.
(2) El disolvente debe coincidir con el detector. Para los detectores de absorción de UV, se debe tener cuidado de seleccionar un detector con una longitud de onda más larga que la longitud de onda de corte de UV del disolvente. La denominada longitud de onda de corte UV de un disolvente significa que cuando una radiación más pequeña que la longitud de onda de corte pasa a través del disolvente, el disolvente absorbe fuertemente esta radiación. En este momento, el disolvente se considera ópticamente opaco, lo que interfiere seriamente. con la medición de la absorción de los componentes.
Para el detector de índice de refracción, es necesario seleccionar un disolvente con una gran diferencia en el índice de refracción de los componentes como fase móvil para lograr la mayor sensibilidad.
(3) Alta pureza. Debido a la alta sensibilidad de la HPLC, la pureza del disolvente de la fase móvil también es alta. Los disolventes impuros pueden provocar inestabilidad basal o producir "falsos picos". La presencia de trazas de impurezas aumentará el valor de la longitud de onda de corte entre 50 y 100 nm.