¿Por qué conectar primero el vector t antes de construir el plásmido recombinante?

El propósito de ligar primero el vector T es mejorar la eficiencia de transformación. En general, los vectores T vendidos en el mercado han sido optimizados y son fragmentos fáciles de conectar (es decir, la eficiencia es mayor). Por lo tanto, al construir vectores de expresión, a veces se conectan primero al portador T. Al mismo tiempo, los cebadores de secuenciación del vector T son relativamente claros (debido a la comercialización), por lo que la secuenciación es más conveniente. Más importante aún, los vectores T a menudo se diseñan con la función de detección de manchas azul-blancas. El vector con los fragmentos insertados aparecerá en blanco, lo que facilita su distinción y verificación. No es necesario utilizar cada colonia para la PCR de colonias o el plásmido. verificación de la digestión. Por supuesto, esto no es absoluto. En nuestro laboratorio, a menudo digerimos directamente los fragmentos y los conectamos al vector de expresión sin pasar por el paso del vector T. De hecho, el impacto no es grande. Si su situación es especial (por ejemplo, el fragmento es más grande o el número de copias del vector de expresión correspondiente es bajo, etc.), puede considerar conectar el vector T; de lo contrario, no es muy necesario.