¿Cómo construir líneas celulares resistentes a los medicamentos?

La resistencia de las células tumorales a los fármacos quimioterapéuticos es uno de los factores importantes en el fracaso del tratamiento tumoral y se ha convertido en un obstáculo para el tratamiento tumoral actual. Por lo tanto, explorar las razones por las cuales las células tumorales desarrollan resistencia a los medicamentos y cómo mejorar la resistencia de las células tumorales a los medicamentos de quimioterapia siguen siendo temas candentes y difíciles en la investigación actual.

El desarrollo de resistencia a los medicamentos en las células tumorales es un proceso complejo. Su mecanismo involucra ampliamente el metabolismo de los medicamentos, la patología, la fisiología y otras disciplinas, lo que determina la resistencia de las células tumorales a los medicamentos de quimioterapia. por lo que el establecimiento de líneas celulares resistentes a los fármacos quimioterapéuticos in vitro sigue siendo un método importante para estudiar el mecanismo de resistencia a los fármacos de las células tumorales.

Un fármaco actúa sobre un determinado tipo de células durante mucho tiempo, matando las células no resistentes, pero no puede matar las células resistentes de este tipo de células, es decir, se realiza selección. Las células resistentes se multiplican en grandes cantidades y producen muchos descendientes resistentes, pero la eficacia del fármaco se reduce considerablemente cuando el fármaco se reutiliza. Este fenómeno es la resistencia de las células a los fármacos que se induce utilizando incrementos de gradiente de concentración bajos in vitro combinados con grandes dosis. Métodos de choque intermitente: las células desarrollan resistencia a fármacos específicos, construyendo así líneas de células tumorales que son resistentes a fármacos específicos.

El contacto prolongado de las células con fármacos en dosis bajas provoca cambios en el proceso químico del fármaco de las propias células. La glicoproteína Pgp aparece en la membrana celular, lo que hace que las células se vuelvan gradualmente tolerantes al fármaco. La concentración del fármaco aumenta, su tolerancia aumenta gradualmente.

A. Detectar la CI50 de la línea celular original.

CI50 (concentración inhibidora media máxima), es decir, concentración inhibidora media, se refiere a una sustancia que inhibe ciertos procesos biológicos para lograr un efecto inhibidor del 50% de concentración a la vez. En términos de proliferación celular, puede entenderse como la concentración del fármaco a la que el efecto inhibidor sobre la proliferación celular alcanza el 50% del nivel de proliferación celular normal. La CI50 se usa generalmente para medir la toxicidad de un fármaco para las células o la capacidad de las células para tolerar el fármaco. En experimentos con drogas, la CI50 se usa a menudo para evaluar la concentración del fármaco utilizada en el experimento. Existen muchos métodos de cálculo para IC50, los más utilizados incluyen Excel, prisma de panel gráfico, SPSS, etc.

B. Método de aumento de la concentración del fármaco/método de choque con el fármaco en dosis altas

1) Método de choque con el fármaco en dosis altas: Células tumorales en la fase de crecimiento logarítmico (confluencia 60-80) Cultivar en un medio de cultivo que contenga una cierta concentración de fármaco, deseche el medio de cultivo, lave dos veces con PBS, reemplace el medio de cultivo libre de fármaco, realice un cultivo regular, espere a que las células reanuden el crecimiento, repita la operación anterior después de un período de cultivo y filtrar las células. Las células continúan cultivándose en una cierta concentración de medio de cultivo de concentración de fármaco y el tiempo de acción cambia constantemente de esta manera ***Después de 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 12 h, 24 h, 36 h. , 48h, 60h, 72h*** 10 períodos de tiempo de acción Después de aproximadamente 6-8 meses de cultivo, las células pueden continuar creciendo de manera estable y pasarse en un medio de cultivo con una cierta concentración de fármacos. Luego se cultivan sin fármacos. durante un mes para detectar las características biológicas y los indicadores de resistencia a los medicamentos de las células.

La ventaja del método de choque con fármacos en dosis altas es que está cerca del método de tratamiento clínico del choque con fármacos de quimioterapia en dosis altas. Sin embargo, la desventaja es que la concentración del fármaco en dosis altas. El método de choque es muy alto debido a cambios repentinos en el entorno externo del cultivo celular, las células pueden ser difíciles de tolerar, el estado celular es difícil de controlar y la resistencia a los medicamentos es inestable.

2) Método de aumento de la concentración del fármaco: Tome células tumorales en la fase de crecimiento logarítmico (confluencia 60-80) y agregue una concentración inicial de baja concentración (se recomienda ser 1/10 de la CI50 del fármaco original). línea celular) -1/5) del fármaco durante 24 horas, desechar el medio de cultivo, lavar dos veces con PBS, sustituir el medio de cultivo libre de fármaco, después de que las células reanuden el crecimiento, digerir y pasar las células y tratarlas con una baja concentración durante 24 horas después de que las células proliferen a su forma normal, repita el choque farmacológico anterior, de 6 a 8 veces para cada concentración. Después de que las células crezcan de manera estable a esta concentración, aumente la concentración del fármaco y continúe cultivando, y agregue el fármaco en concentraciones crecientes en secuencia. La inducción del fármaco dura de 6 a 8 meses hasta que las células pueden crecer de manera estable en la concentración del fármaco.

La ventaja del método de aumento de la concentración del fármaco es que la dosis del fármaco para inducir células resistentes a los medicamentos cambia gradualmente y el entorno externo del cultivo celular cambia gradualmente. Las células son más fáciles de tolerar y se encuentran en mejores condiciones. condición. La desventaja es que el proceso de inducción de resistencia a los medicamentos lleva mucho tiempo y existen ciertas diferencias entre el modo de acción de los medicamentos de quimioterapia y el principio clínico de la quimioterapia de dosis alta y de corta duración. p> C. Detección de IC50 de líneas celulares resistentes a medicamentos

Detección de resistencia La IC50 de la línea celular resistente a medicamentos se utiliza para calcular el índice de resistencia (RI) en función del valor de IC50=. IC50 de la línea celular resistente a los medicamentos/IC50 de la línea celular original, RIgt si es 5, se considera que la resistencia a los medicamentos de la línea celular resistente a los medicamentos está en línea con los requisitos de las cepas medicinales.

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