Cómo lograr una detección rápida y un control eficaz de Salmonella
Salmonella es una enterobacteria gramnegativa y el patógeno transmitido por alimentos más importante de la familia Enterobacteriaceae. Según estadísticas relevantes, los casos de enfermedades causadas por Salmonella representan más de dos tercios de los casos de enfermedades patógenas transmitidas por los alimentos. El "Incidente de la mantequilla de maní" en 2007 y el "Incidente del tomate" en 2008 [1] Salmonella La aparición de intoxicaciones. Estos incidentes también han llamado la atención sobre la detección de Salmonella en los alimentos. Este artículo realiza principalmente una revisión sistemática de los métodos tradicionales de detección de Salmonella en alimentos y los métodos de detección rápida posteriores basados en biología molecular, inmunología, biosensores y electroquímica, con el objetivo de detectar esta bacteria patógena.
1. Métodos de detección tradicionales (método estándar nacional)
Actualmente, la mayor parte de la detección de Salmonella en alimentos en mi país adopta GB 4789.4-2010 "Pruebas microbiológicas de Salmonella en alimentos" para muestras de alimentos Para la detección, este método de cultivo tradicional se puede dividir en pasos como preenriquecimiento, enriquecimiento, aislamiento y cultivo, pruebas bioquímicas e identificación serológica. Aunque los métodos de cultivo tradicionales son muy confiables, sus operaciones son engorrosas, requieren mucho tiempo y mano de obra, y no pueden cumplir con los requisitos para realizar pruebas rápidas de alimentos.
2. Métodos de detección de biología molecular
2.1 Tecnología de reacción en cadena de la polimerasa
La tecnología PCR es un método de detección microbiana altamente sensible, específico, rápido y preciso. También utilizado por muchos estudiosos para detectar y estudiar Salmonella en los alimentos. Wang Qi et al. [2] utilizaron tres métodos: método de cultivo tradicional, método BAX(r) y método de PCR para detectar Salmonella. Sobre la base de la PCR convencional, Song Dongxiao [3] estableció un nuevo método de PCR para detectar Salmonella en los alimentos: la PCR múltiple. Además, también se utilizan otras nuevas tecnologías de PCR en la detección de Salmonella en alimentos. Zhong Weijun [4] estableció un método de PCR cuantitativa de fluorescencia de ácido nucleico para la detección de Salmonella explorando el sistema de reacción de PCR cuantitativa de fluorescencia y las condiciones de reacción. proporciona un método rápido para la detección de Salmonella en los alimentos. El desarrollo de kits de detección sentó una buena base.
2.2 Tecnología de sondas de ácido nucleico
La tecnología de sondas de ácido nucleico se basa en el principio de complementariedad de bases de nucleótidos y añade fragmentos de ADN específicos marcados con isótopos a muestras de ADN mutadas, los dos fragmentos se hibridan. bajo ciertas condiciones para lograr el propósito de detectar ADN. Esta tecnología no sólo es sencilla y rápida, sino también muy sensible y específica. Se ha utilizado para la detección de Salmonella en alimentos. Almeida et al. [5] establecieron una nueva sonda de ácido nucleico peptídico combinada con un método de hibridación fluorescente in situ para detectar Salmonella en muestras de sangre, heces, agua y leche en polvo infantil con una precisión de hasta el 100%.
2.3 Tecnología de chip genético
La tecnología de chip genético utiliza sondas con secuencias de ácido nucleico conocidas para hibridar con secuencias de nucleótidos objetivo y luego realiza análisis cualitativos y cuantitativos mediante la detección de señales. Tiene una buena aplicación. perspectivas en el análisis y detección de diversas bacterias patógenas como Salmonella. Rao Bao et al. [6] establecieron un método de detección de chips genéticos para detectar bacterias patógenas y diseñaron cebadores universales y sondas específicas: sonda de Salmonella, sonda de E. coli y sonda de Staphylococcus aureus, logrando detección y diferenciación simultánea de Salmonella, E. coli y. Fines de Staphylococcus aureus. Zhu Rugang et al. [7] utilizaron PCR múltiple combinada con tecnología de chips genéticos para establecer un método para detectar cinco tipos de alimentos, incluidos Escherichia coli, Salmonella, Staphylococcus aureus, Shigella y Listeria monocytogenes en carne y productos cárnicos. bacterias patógenas.
2.4 Tecnología de lisis de fagos
Los bacteriófagos pueden lisar bacterias específicamente. Zhang Bibo y otros académicos utilizaron esta tecnología para detectar rápidamente Salmonella y los resultados fueron los mismos que los de otros académicos. En base a esto, concluyeron que fagos específicos pueden detectar Salmonella y que este método es conveniente y factible. .
Jiang Qin et al. [8] utilizaron lisis de fagos para detectar rápidamente 150 muestras de alimentos. Los resultados mostraron que la combinación de fagos de Enterobacteriaceae era altamente sensible y específica para Salmonella cultivada durante 10 horas. Esto es útil para realizar pruebas en tiempo real, de forma rápida y precisa. Detección de Salmonella significado importante.
2.5 Tecnología de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP)
La tecnología de amplificación isotérmica mediada por bucle es un nuevo método de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos desarrollado por Notomi et al. se caracteriza por una fuerte especificidad, alta sensibilidad, simplicidad y rapidez, y es adecuado para la detección rápida de muestras a gran escala [9]. Li Jiatong [10] estableció un método de detección LAMP para Salmonella a través de experimentos y comparó este método con la PCR convencional. Los resultados mostraron que el método LAMP solo requiere 40 minutos para detectar Salmonella a una temperatura constante de 65 °C. Solo amplifica Salmonella y. no lo amplifica. Para otras bacterias Gram-negativas, la concentración más baja detectable es 10 ufc/mL, que es un orden de magnitud mayor que la concentración más baja detectable de la PCR convencional. Al agregar el colorante fluorescente SYBR Green Ⅰ, el verde positivo. El resultado se puede observar y detectar rápida y fácilmente, lo cual es muy obvio y se distingue de un resultado negativo en naranja.
3. Métodos inmunológicos
3.1 Tecnología de inmunoabsorción ligada a enzimas
El método de inmunoabsorción ligada a enzimas se conoce como ELISA. Esta tecnología es altamente sensible y no. requieren equipos especiales que facilitan la observación de los resultados. Ya en 1977, se informó que se utilizaba un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas para la detección de Salmonella en los alimentos. Wu Yanhua et al. [11] diseñaron anticuerpos de captura y anticuerpos de detección, y establecieron un método ELISA rápido de sándwich de doble anticuerpo para detectar Salmonella en los alimentos. Zhang Shuai et al. [12] establecieron un sistema ELISA tipo sándwich de doble anticuerpo para detectar Salmonella en muestras de carne contaminada simulada. El límite de detección es de 800 UFC/g. Es homogéneo y no tiene reacción cruzada con otros serotipos de Salmonella, Listeria monocytogenes. y otras bacterias. Es específico. Buen sexo.
3.2 Tecnología de etiquetado por inmunofluorescencia
La tecnología de etiquetado por inmunofluorescencia se basa en la reacción específica antígeno-anticuerpo, marcando con fluoresceína el antígeno (o anticuerpo) conocido y combinándolo con el anticuerpo específico. (o antígeno) genera fluorescencia después de la unión, que puede usarse para localizar el antígeno o anticuerpo y determinar el contenido mediante análisis cuantitativo. Ye Mingqiang [13] estableció un método para la detección rápida del contenido de Salmonella en los alimentos basado en el enriquecimiento de perlas nanoinmunomagnéticas y el etiquetado inmunológico de puntos cuánticos, y desarrolló una nueva tecnología de detección de bacterias patógenas transmitidas por alimentos mediante inmunofluorescencia.
3.3 Método de percolación puntual de inmunooro
La tecnología de inmunooro coloidal es una nueva tecnología que utiliza oro coloidal como marcador combinado con el principio de inmunidad y se aplica a antígenos y anticuerpos. El que más utiliza es el más extendido: la filtración por inmunooro puntual (DIGFA). Kong Fande et al. y Cao Chunmei et al. han utilizado esta tecnología para estudiar la detección rápida de Salmonella. Cao Chunmei et al. [14] utilizaron el método de filtración por inmunooro de puntos para estudiar el antígeno O9 de Salmonella. , rápido y adecuado para la popularización y aplicación; Kong Fande et al. [15] estudiaron esta bacteria estableciendo un kit de prueba de percolación de inmunooro puntual para la detección directa de Salmonella.
3.4 Tecnología de separación inmunomagnética
La tecnología de separación de perlas inmunomagnéticas acopla anticuerpos monoclonales o polianticuerpos a patógenos específicos con perlas magnéticas y forma perlas magnéticas a través de reacciones antígeno-anticuerpo, las perlas magnéticas se moverán. direccionalmente bajo la acción de un campo magnético externo, logrando así el propósito de separar el patógeno objetivo. Hay muy pocas bacterias patógenas en las muestras de alimentos y es difícil separarlas mediante métodos convencionales. Se puede lograr una separación rápida con la ayuda de la tecnología de separación inmunomagnética. Wang Haiming et al. [16] aplicaron tecnología de inmunoensayo magnético para establecer un método para la detección rápida de Salmonella transmitida por los alimentos. Los resultados muestran que este método puede enriquecer rápida y eficazmente las bacterias objetivo en la matriz del alimento. 10 ufc/25 g, y el ciclo de detección es de aproximadamente 40 horas. Hu Fei [17] también estableció un método de detección rápida utilizando tecnología de separación inmunomagnética combinada con tecnología de cromatografía de fluorescencia para Salmonella typhimurium a través de experimentos.
4. Tecnología de biosensores
Los biosensores utilizan algunas sustancias biológicamente activas, como enzimas, sistemas multienzimáticos, anticuerpos, etc., como dispositivos sensibles y luego los combinan con transductores de señal adecuados. Una herramienta de análisis y detección. Los académicos chinos han utilizado este método para detectar la inmunoadsorción de antígenos y anticuerpos de Salmonella, y se ha utilizado para detectar rápidamente Salmonella patógena en los alimentos. Solo toma 1 hora, logrando el propósito de una detección rápida. Ning Yi [18] construyó un biosensor de nanotubos de carbono basado en el estudio de las propiedades de los nanotubos de carbono y lo combinó con sondas moleculares y lo utilizó para la detección de Salmonella. Los resultados mostraron que el sensor construido tiene una alta sensibilidad y una fuerte especificidad. Buena estabilidad.
5. Tecnología de impedancia eléctrica
El método de impedancia eléctrica es una tecnología biológica desarrollada en los últimos años debido a sus ventajas de velocidad de detección rápida, alta sensibilidad y buena precisión, se utiliza actualmente. El método se ha utilizado para la detección de Salmonella en alimentos y ha sido reconocido por la Asociación Americana de Química Analítica (AOAC). Chen Guangquan et al. [19] establecieron un método para la detección rápida de Salmonella en los alimentos mediante el método de impedancia eléctrica y lo compararon con el método de cultivo convencional para detectar el género Salmonella en los alimentos. Los resultados mostraron que el método de impedancia eléctrica es más rápido y confiable. que el método de cultivo tradicional.
6. Resumen
En resumen, la tecnología de prueba de Salmonella está mejorando desde los métodos de cultivo tradicionales hasta los métodos de detección molecular, y se está desarrollando en la dirección de la instrumentación, la estandarización y la automatización, y la alimentación. Cuestiones como la seguridad y las bacterias patógenas han planteado graves amenazas a la salud humana y al medio ambiente. Es imperativo fortalecer la detección de Salmonella. En la actualidad, la mayoría de las tecnologías de detección rápida de Salmonella tienen las características de detección rápida, alta sensibilidad y fuerte especificidad. Además, estos métodos también tienen sus propias ventajas y limitaciones en el proceso de desarrollo futuro. e innovar para establecer una tecnología de detección rápida de Salmonella más madura, confiable, conveniente y rápida.