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¿Qué factores afectan la expresión de genes deseados en E. coli? Número de visitas: 904 veces Etiquetas: | Turno de preguntas: 2009-4-28 17:30 | Preguntado por: lys2126
¿Qué factores afectarán la expresión de los genes diana en E. coli?
Respuestas recomendadas (1) Número de copias de genes extraños
(2) Eficiencia de expresión de genes extraños
①Fuerza del promotor
Eficaz ②El género del sitio de unión del ribosoma
③La secuencia SD y la distancia ATG entre el codón de inicio
④Los codones
⑶La estabilidad del producto expresado
(4) Carga metabólica celular
⑸Ingeniería de condiciones de cultivo de bacterias
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Establecer un vector para expresar el gen objetivo Secretado fuera de las raíces de las plantas y células de la raíz. Indique el número de pasos: 842 Puntos de recompensa: 20 | Resolviendo el problema
Hora: 2009-2-14 09:13 | Interlocutor: 370 629 225
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Crear un vector de expresión vegetal para un gen extraño específico y transferirlo a la planta receptora, sin el objetivo final de transformación genética de la planta. La planta transgénica ideal normalmente requiere altos niveles de expresión del gen extraño en una ubicación específica y en un momento específico para el rasgo fenotípico deseado. Sin embargo, en las últimas dos décadas de desarrollo, la eficiencia de expresión de las plantas transgénicas ha sido a menudo baja, los productos de expresión son inestables e incluso la inactivación o el silenciamiento de genes y otros fenómenos indeseables han impedido la aplicación práctica de genes extraños en plantas transgénicas en receptores. plantas. Además, las cuestiones de seguridad de las plantas genéticamente modificadas han atraído la atención de muchos países. Por ejemplo, la transmisión del polen de las plantas genéticamente modificadas y los genes marcadores de selección de antibióticos pueden hacer que ciertos antibióticos sean clínicamente inútiles. El surgimiento de esta ingeniería genética vegetal de alta tecnología llega en un momento sin precedentes plagado de los problemas antes mencionados. Para resolver estos problemas, en los últimos años, la gente ha cultivado tecnología transgénica, explorado y mejorado una amplia gama de vectores de expresión de plantas, y la mejora y optimización son uno de los contenidos más importantes de este artículo.
La selección y transformación del promotor de nivel 1 de expresión genética exógena es a menudo una razón importante para que las plantas transgénicas no sean satisfactorias. Los promotores desempeñan un papel clave en la determinación de la expresión génica, por lo tanto, seleccionar un promotor vegetal adecuado para mejorar su actividad es la primera consideración para mejorar la expresión de genes exógenos.
En este vector de expresión vegetal, el promotor ampliamente utilizado es un promotor constitutivo. Por ejemplo, la mayoría de las plantas transgénicas dicotiledóneas utilizan el promotor CaMV35S, y las plantas transgénicas monocotiledóneas se utilizan principalmente a partir del promotor Ubiquitina procedente del maíz y el promotor Actinl. del arroz. El gen exógeno queda bajo el control del promotor de expresión de estos componentes y se expresa en todas las partes de la planta transgénica y en todas las etapas de desarrollo. Sin embargo, la expresión continua y efectiva de genes extraños en la planta receptora no sólo causa desperdicio, sino que a menudo también causa cambios morfológicos en la planta, afectando el crecimiento y desarrollo de la planta. Para funcionar eficazmente en las plantas y al mismo tiempo reducir los efectos adversos en las plantas, se presta cada vez más atención a la investigación y aplicación de promotores de expresión específicos para genes extraños. Se ha descubierto que promotores específicos, incluidos promotores específicos de órganos, inducen promotores específicos. Por ejemplo, promotores específicos de semillas, promotores específicos de frutos, promotores específicos de células del mesófilo, promotores específicos de raíces, promotores específicos de daños, promotores específicos inducidos químicamente, promotores específicos inducidos por luz, promotores específicos inducidos por choque térmico. La clonación de promotores específicos sienta las bases para la expresión de genes extraños específicos en plantas. Por ejemplo, el promotor suizo CIBA-GEIGY PR-IA controla la expresión del gen de la proteína de la toxina Bt en el tabaco transgénico. El promotor induce la pulverización de ácido salicílico y sus derivados, que son productos químicos baratos y no contaminantes e inducen la expresión de genes de resistencia. a las plagas, que volverá a ocurrir esta temporada, obviamente es un enfoque muy eficaz.
En la investigación de plantas transgénicas, a menudo no se logran resultados satisfactorios, especialmente cuando se utilizan promotores naturales para la expresión específica y la expresión inducida, y los niveles de expresión en su mayoría no son ideales. Será una forma muy importante de transformar el subsistema de inicio existente para construir un inicio compuesto.
Por ejemplo, el promotor del gen de la octopina sintasa y el promotor del gen de la manolina sintasa en la región de activación de la transcripción de Ni, etc., los resultados de la expresión de GUS muestran que la actividad del promotor modificado es más significativa que la del promotor 35S. Wu Rui et al. utilizaron una combinación del intrón Actinl de arroz para manipular el promotor del gen PI-II inducible, y una nueva actividad del promotor expresado aumentó casi 10 veces (patentado). En la investigación sobre ingeniería genética vegetal, la iniciación de estas formaciones artificiales juega un papel importante.
La construcción de vectores para mejorar la eficiencia de la traducción de genes extraños, generalmente modificación genética, considera principalmente tres aspectos:
2.1 Mejora de la eficiencia de la traducción 5'-?3' - Secuencia de no traducción
Muchos experimentos han descubierto que la secuencia no traducida (UTR) 5'-3' de genes eucarióticos es muy necesaria para la expresión normal del gen, y la ausencia de esta región a menudo da como resultado que el ARNm La estabilidad y el nivel de traducción se reducen significativamente. Por ejemplo, aguas arriba del sitio de inicio de la traducción del gen proteico de 126 kDa del virus del mosaico del tabaco (TMV) hay un elemento omega de nucleótidos de 68 pb, que proporciona un nuevo sitio de unión a ribosomas para aumentar la actividad de traducción del gen Gus. veces. Hay muchos vectores que añaden una secuencia potenciadora de la traducción omega al extremo 5' del gen extraño. Ingelbrecht estudió las secuencias terminales 3' de varios genes y descubrió que la secuencia terminal 3' del gen de la octopina sintasa aumentaba la expresión transitoria del gen NPTII en más de 20 veces. Además, la eficacia de la mejora de la expresión génica de diferentes genes es diferente en el efecto de promoción sobre la expresión génica, por ejemplo, la secuencia del extremo 3' de rbcS. La secuencia del extremo 3' de la secuencia del extremo 3' del gen de la chalcona sintasa. 60 veces la secuencia.
2.2 Optimizar la secuencia que rodea al codón de inicio
Aunque los codones de inicio son comunes en la biosfera, los genes de diferentes fuentes biológicas tienen su propia secuencia de codones externos especiales. Por ejemplo, la característica típica de la secuencia alrededor del codón de inicio de las plantas es AACCAUGC, mientras que la secuencia alrededor del codón de inicio de los animales es CACCAUG, que es bastante diferente de la de los procariotas. Kozak estudió en detalle los efectos de la mutagénesis dirigida por bases adyacentes a ATG en la transcripción y traducción antes del codón de inicio, y concluyó que alrededor de ACCATGG en eucariotas, la secuencia más efectiva para el codón de inicio de transcripción y traducción, especialmente es -3 bits. La eficiencia de entrada de A es muy importante. La secuencia construida de la secuencia comprada, denominada secuencia Kozak, se aplica al vector de expresión. Por ejemplo, un gen de quitinasa bacteriana y la secuencia que rodea el codón de inicio original UUUAUGG a ACCAUGG aumentaron los niveles de expresión 8 veces en el tabaco. Por lo tanto, el uso de vectores de expresión para construcciones genéticas de origen no vegetal debe basarse en las características de la secuencia que rodea al codón de inicio de la planta que se va a transformar.
2.3 La región codificante del gen es para la transformación
Si el gen extraño es de un organismo procariótico, la diferencia en el mecanismo de expresión de estos genes en las plantas suele ser muy baja Expresión Los niveles, por ejemplo, del gen de la proteína insecticida de tipo salvaje de Bacillus thuringiensis expresado en plantas, son muy bajos, y los estudios han encontrado que esto se debe a diferencias en la estabilidad de los ARNm de genes procarióticos y vegetales. Monsanto Perlak se basó en la transformación genética de proteínas tóxicas, proteínas insecticidas sin cambiar la secuencia de aminoácidos, el uso de codones preferidos por las plantas, el contenido de GC y la eliminación de elementos en la secuencia original que afectan la estabilidad del ARNm, lo que da como resultado la expresión de proteínas tóxicas. en plantas transgénicas aumentó de 30 a 100 veces en insectos.
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Eliminando el efecto de posición tras eliminar el gen extraño de la planta receptora, suele haber niveles de expresión muy diferentes en diferentes plantas transgénicas. Esto se debe principalmente a los diferentes sitios de inserción del gen extraño en el genoma de la planta receptora. A esto se le llama "efecto de posición". Para eliminar los efectos de posición, los genes extraños se integran en vectores de expresión del genoma de plantas en la región transcripcionalmente activa. Las estrategias de construcción actuales generalmente tienen en cuenta la región de unión a la matriz nuclear y la aplicación de tecnología de integración dirigida al sitio.
La región de unión a la matriz nuclear (matrix Association Region, MAR) es una secuencia de ADN que se une a porciones específicas de la matriz nuclear de la cromatina eucariota.
Generalmente, las secuencias MAR están ubicadas en la estructura circular del ADN transcripcionalmente activo y su función es permitir la división, permitiendo así que cada unidad de transcripción mantenga una relativa independencia de la influencia de la cromatina circundante. Este estudio muestra que colocar el MAR en ambos lados de la construcción MAR que contiene MAR necesaria para la transformación genética en un vector de expresión de la planta puede aumentar significativamente el nivel de expresión del gen objetivo y reducir las diferencias en el gen objetivo entre plantas transgénicas. Los niveles de expresión reducen la ubicación del efecto. Por ejemplo, Allen et al. estudiaron la expresión de los genes Gus MAR heterólogo (de levadura) y MAR homólogo (de tabaco) en el tabaco y descubrieron que el MAR de levadura aumentaba el nivel promedio de expresión del transgén en 12 veces, y el nativo del tabaco. MAR aumentó la expresión del transgén 12 veces. El nivel promedio de expresión del transgén aumentó 60 veces. El gen de la lisozima de pollo de MAR también puede desempeñar el mismo papel.
Otro método factible es utilizar tecnología de integración dirigida al sitio. El principio principal de esta tecnología es transformar el cromosoma del vector huésped y el gen extraño se integrará en el sitio homólogo de un ADN específico. Fragmento del cromosoma mediante recombinación homóloga. En la operación real, cuando se aísla primero el fragmento de ADN de la región transcripcionalmente activa del cromosoma, luego se construye un vector de expresión vegetal. La integración dirigida de la recombinación homóloga en microorganismos se ha convertido en una manipulación genética de rutina y se ha utilizado con éxito para integrar con éxito genes extraños en animales y vectores de expresión de cloroplastos en plantas, y todavía hay muy pocos exitosos para lograr la integración dirigida de genes exógenos. Casos del método de transformación nuclear.
4 Construcción del vector de expresión del cloroplasto
La transformación nuclear exógena se utiliza a menudo para superar la expresión genética debido a prácticas sexuales inseguras, como el efecto de posición de la dispersión del polen de los genes nucleares, una nueva baja -tecnología de transformación genética eficiente que sólo ha aparecido en los últimos años- la transformación de cloroplastos ha sido cada vez más reconocida y valorada por sus ventajas y perspectivas de desarrollo. Hasta el momento se han publicado 5 especies de transformación hereditaria de cloroplastos en tabaco, arroz, Arabidopsis, patata y colza (Hou Bingkai et al.), haciendo que esta tecnología de transformación comience a convertirse en un nuevo punto de crecimiento en la ingeniería genética vegetal.
Se ha probado que el mecanismo de recombinación homóloga ha sentado las bases para la integración específica de sitio de genes extraños en el genoma del cloroplasto de varias secuencias del genoma del cloroplasto de plantas. La construcción actual de vectores de expresión de cloroplasto es básicamente sitio. -vectores de integración específicos. La construcción de un vector de expresión de cloroplasto es básicamente un vector de punto a ejemplo. La generación de vectores de expresión de cloroplastos generalmente implica un casete de expresión para un gen extraño, con cada período de ligación flanqueado por secuencias de ADN de cloroplasto, denominadas fragmentos de recombinación homóloga o segmentos de posicionamiento (fragmentos direccionales). Cuando el vector se introduce en el cloroplasto, los dos fragmentos tienen el mismo fragmento y se produce una recombinación homóloga en el genoma del cloroplasto. Es una ubicación específica que puede integrar el gen extraño en el genoma del cloroplasto. El propósito de la transformación del cloroplasto en el mejoramiento de cultivos requiere que después de que ocurra la recombinación homóloga, la inserción del gen extraño en el genoma del cloroplasto no cause la pérdida de la secuencia original ni destruya la función del gen original en el punto de inserción. Para cumplir con este requisito, el trabajo existente ha seleccionado fragmentos de recombinación homóloga de dos genes adyacentes, como el gen rbcL/ACCD cuatro, 16StrnV/rpsl2rps7, el gen/variante psbA, rps7/ndhB. Después de que se produce la recombinación homóloga del gen extraño designado, se inserta en la región espaciadora entre dos genes adyacentes para garantizar que la función original del gen no se vea afectada. Recientemente, Daniel y otros utilizaron fragmentos de recombinación homóloga de ARNt y trnI del genoma del cloroplasto del tabaco para construir un vector único (vector universal). Dado que las secuencias de ARNt y ADN trnI están altamente conservadas en las plantas superiores, los autores sugieren que dichos vectores pueden usarse para la transformación de cloroplastos en una variedad de plantas diferentes. Si se confirma la versatilidad de este vector, entonces este trabajo sin duda proporciona una buena idea para construir un vector de expresión de cloroplasto nuevo, conveniente y práctico.
La expresión de la integración específica de sitio de genes extraños en el genoma del cloroplasto se debe a menudo al alto número de copias del genoma del cloroplasto. En el primer ejemplo, la introducción del gen de la toxina cryIA(c) por parte de BT. McBride et al. La alta eficiencia de la expresión de la proteína de la toxina Bt del cloroplasto del tabaco es tan alta como del 3% al 5% de la proteína total en la hoja, mientras que una técnica típica de transformación nuclear solo puede alcanzar del 0,001% al 0,6%.
Recientemente, Kota Kinabalu, que introdujo el gen Bt Cry2Aa2 en los cloroplastos del tabaco, también descubrió que la expresión de proteínas tóxicas en las hojas de tabaco, que representan del 2% al 3% de las proteínas solubles, es de 20 a 30 veces mayor que la de las hojas de tabaco transformadas nuclearmente. , el tabaco transgénico no sólo combate los insectos sensibles, sino que también mata a aquellos que tienen una alta resistencia a los insectos. Stobbe informó recientemente que el nivel de expresión del gen de la hormona del crecimiento humano introducido en los cloroplastos del tabaco llegaba al 7% de la proteína de la hoja, más de 300 veces mayor que el del método de transformación nuclear. Estos experimentos desarrollaron completamente la construcción y transformación de vectores de expresión de cloroplastos, que es una forma importante de lograr un alto nivel de expresión de genes extraños.
5 Aplicaciones de las Señales de Posicionamiento
El objetivo principal de las estrategias de optimización de vectores anteriores es mejorar la eficiencia de la transcripción y traducción de genes extraños. Sin embargo, se logra un alto nivel de expresión de proteínas extrañas. Es necesario tener en cuenta si se puede estabilizar en células vegetales y otras cuestiones importantes a la hora de acumular cantidades transformadas genéticamente en las plantas.
Investigaciones recientes han descubierto que si un determinado gen extraño está conectado al posicionamiento correcto de la secuencia señal, la proteína extraña se producirá y se transportará a un sitio específico de la célula, por ejemplo: cloroplastos, endotelio. Las células, el retículo plasmático, las vacuolas, etc., pueden mejorar significativamente la estabilidad del sistema y la acumulación de proteínas extrañas. ¿Esto se debe a un área específica? El entorno dentro del retículo endoplásmico de ciertas proteínas exógenas proporciona un entorno relativamente estable que previene eficazmente la degradación de proteínas exógenas. Por ejemplo, Wong et al. vincularon la secuencia del péptido de tránsito de la subunidad grande de Arabidopsis thaliana Rubisco a un gen de proteína insecticida especializado antes de acumularse en los cloroplastos del tabaco transgénico. La acumulación total de proteína extraña aumentó de 10 a 20 veces en comparación con el grupo de control. Recientemente, Ye Liang y Song Wang Yanru conectaron la secuencia del péptido de tránsito de la subunidad rbcS al gen de síntesis previa a PHB en un intento de permitir la acumulación de productos genéticos en la masa de semillas de colza transgénicas, aumentando así el contenido de proteínas exógenas. Wandert y Stern relacionaron la localización del retículo endoplásmico y descubrieron que el contenido de la proteína extraña en las plantas transgénicas había mejorado significativamente mediante la secuencia del gen de la proteína extraña (la secuencia codificante del tetrapéptido KDEL). Claramente, la señal de localización juega un papel positivo en la promoción de la acumulación de proteínas, pero es necesario determinar más a fondo si la misma señal de localización se aplica a todas las proteínas.
La expresión genética potenciada por intrones de 6 intrones fue descubierta originalmente en maíz transgénico por Callis et al., el primer intrón del gen de la alcohol deshidrogenasa de maíz (ADHL) (Intrón 1) La expresión de genes extraños es significativamente mejorado, y otros genes intrones (como el intrón9) también tienen una cierta cantidad de efecto de promoción. Más tarde, Vasillev también descubrió que el primer intrón del gen CAT de la fructosa sintasa del maíz aumentaba el nivel de expresión 10 veces. El tercer intrón, el gen de actina del arroz, también aumentó el nivel de expresión del gen indicador de 2 a 6 veces. El mecanismo por el cual los intrones de fecha mejoran la expresión genética no está claro, pero en general se cree que la presencia de intrones puede mejorar la eficiencia del procesamiento del ARNm y la estabilidad del ARNm. Tanaka et al., algunos estudios han demostrado que el efecto potenciador de los intrones sobre la expresión genética se produce principalmente en monocotiledóneas y dicotiledóneas, pero no es obvio.
McElroy construyó un vector de expresión monocotiledónea debido a la mejora de intrones, específicamente el primer intrón del gen de actina de arroz que mantiene la expresión génica de genes aguas abajo del promotor. De manera similar, Christensen et al. colocaron el gen del primer intrón del vector de ubiquitina de maíz aguas abajo del promotor en el vector construido para mejorar la expresión de genes extraños en monocotiledóneas. Sin embargo, los estudios han señalado que la influencia en la expresión génica depende de muchos factores como la fuerza del promotor, el tipo de célula, la secuencia del gen diana, etc., dependiendo del papel del intrón específico y, en ocasiones, incluso depende de la posición del el intrón en el vector. Por ejemplo, el gen ADHL 9 del maíz se coloca en el extremo 5' del gen Gus, y el gen GUS se expresa bajo el control del promotor CaMV35S sin potenciación cuando el extremo 3' del intrón se coloca en el intrón de; el gen gus. Bajo el control del mismo iniciador, el nivel de expresión del gen gus aumentó aproximadamente 3 veces. El mecanismo de expresión génica por intrones puede ser muy complejo. Se puede observar que falta un modelo fijo sobre cómo los intrones pueden establecer vectores de expresión vegetales eficientes y merece un estudio más profundo.
Política de control de poligenes
Hasta el momento, la mayoría de estudios de transformación genética se llevan a cabo mediante la introducción de un único gen exógeno en la planta receptora.
Pero, ¿aún no se han obtenido plantas transgénicas ideales, a veces gracias a la expresión de un único gen o a un único mecanismo de acción? Si dos o más genes tienen un efecto sinérgico en la planta al mismo tiempo, se obtendrá un resultado más preferible que la conversión de un solo gen. Esta estrategia se ha aplicado al mejoramiento de plantas transgénicas que son resistentes a enfermedades, insectos y tolerantes al estrés. Por ejemplo, según el espectro de los insectos y los diferentes mecanismos de acción de los genes resistentes a los insectos, se pueden construir dos vectores de genes funcionalmente complementarios y los dos genes resistentes a los insectos se pueden introducir en las plantas de una determinada manera. Wang Wei y otros genes de lectinas y genes inhibidores de proteasas se transfirieron simultáneamente a plantas de algodón transformadas que ya contenían genes bivalentes de resistencia a insectos. Cuando el gen de la proteína insecticida Barton Bt y el gen de la toxina del escorpión se introducen en el tabaco, la resistencia y la capacidad de los insectos mejoran enormemente para evitar que las plagas desarrollen resistencia (patentado). Con una fuerte resistencia a las enfermedades, el laboratorio de Lanyan construyó vectores de expresión de plantas que contenían genes bivalentes de β-1,3-glucanasa y genes de quitinasa, y los introdujo en semillas de colza y algodón. Los resultados mostraron que las plantas transgénicas producían una resistencia significativa. Recientemente, Fengdaoantong y Li Baojian incluso colocaron de 2 a 3 genes de resistencia a enfermedades fúngicas y genes hpt en vectores. Tanto el gen de resistencia a insectos como el gen bar se conectaron a otro vector y se introdujeron en el arroz utilizando una pistola genética. La progenie de R contiene los genes extraños introducidos (6 a 7) y la tendencia de uno o ambos loci genómicos introducidos de los múltiples genes extraños a integrarse.
En la conversión convencional general, no es posible introducir fragmentos de ADN extraños que superen los 25 KB en células vegetales. Los genes funcionalmente relacionados, como los loci de rasgos cuantitativos en los genes de resistencia a enfermedades de las plantas, se encuentran principalmente en forma de grupos de genes. Si algunos fragmentos grandes de ADN de más de 100 KB, como grupos de genes en los cromosomas naturales de las plantas o una serie de genes extraños no vinculados, se introducen en el mismo punto del genoma de la planta, puede parecer que está controlado por múltiples genes. Excelentes rasgos pueden conducir a una resistencia de amplio espectro a los insectos y a las enfermedades, y se puede obtener una vía metabólica completamente nueva en las células receptoras para producir nuevas biomoléculas. Además, los fragmentos grandes de grupos de genes o la inserción sincrónica de grupos de genes también pueden superar en cierta medida el efecto de posición causado por los transgenes y reducir la aparición de fenómenos indeseables como el silenciamiento de genes. Recientemente, Hamilton y Alfred en Estados Unidos desarrollaron un sistema de vectores de nueva generación para clonar grandes fragmentos de ADN y transformar directamente plantas BIBAC y TAC con la ayuda de Agrobacterium tumefaciens. Los dos operadores no sólo acelerarán la clonación de genes basada en mapas, sino que también tendrán aplicaciones potenciales para el control de múltiples genes y la mejora de variedades. En la actualidad, la investigación aplicada en transformación multigénica apenas ha comenzado. En los vectores BIBAC y TAC
8 Uso y eliminación de genes marcadores seleccionables
Las células (o individuos) que pueden transformarse durante la transformación genética de genes marcadores seleccionables se seleccionan a partir de un gran número de las células no transformadas eliminan los genes marcadores. A menudo pueden producir células transgénicas que tienen resistencia al producto de un agente de selección, de modo que las células transgénicas en medios de crecimiento normales añaden dicha selección debido a la falta de resistencia de las células no transgénicas que exhiben sensibilidad a este agente de selección. crecimiento, desarrollo y diferenciación. El vector se construye para conectar el lado del gen marcador seleccionable con el gen diana, los cuales tienen sus propias secuencias reguladoras genéticas (como promotor, terminador, etc.). Hay dos categorías principales de genes marcadores seleccionables: genes de resistencia a antibióticos y genes de resistencia a herbicidas. Los primeros pueden desarrollar resistencia a los antibióticos y los segundos pueden desarrollar resistencia a los herbicidas. Los genes de resistencia a los antibióticos utilizados incluyen el gen NPTII (resistencia a la higromicina) y el gen Gent que produce higromicina fosfotransferasa, neomicina fosfotransferasa y resistencia a la kanamicina), el gen HPT (que produce (genes de resistencia a herbicidas, incluidos los genes EPSP (produce 5-piruvato -shikimato-3-fosfato sintasa, glifosato), genes GOX (la glifosato oxidasa degrada el glifosato), genes bar (que producen PPT acetiltransferasa, anti-bialafos o glufosinato)
Los anteriores 1, 2, 3, 5, 6, todos son notables, especialmente porque ingresa a las células. El vector principal exocrino se puede seleccionar como PB I121 y luego puede realizar cambios en el genotipo anterior.
Los pasos de clonación detrás de él son. relativamente sencillo.
1. Primer sitio de digestión con enzimas de restricción para obtener el gen deseado, además de un buen vector para introducir cambios.
2. Amplificación de plásmido transformado en Escherichia coli DH5α
Amplificación de células vegetales transformadas con buen plásmido
4. Recolección de medio extraraíz para detectar proteína Expresión y secreción. Es
En cuanto a la transformación del transportista, bastarán unos sencillos pasos. Después de responder, si realmente hacemos un buen transportista, podremos abrir nuestra propia empresa.