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Construcción de la biblioteca de transposasa NGS012 y ATAC-seq

Una secuencia de ADN se puede copiar o romper por separado del sitio original, circularizada e insertada en otro sitio, y regula los genes posteriores. Este proceso se llama transposición. Esta secuencia se llama gen saltador o transposón. Los transposones son unidades básicas que existen en el ADN cromosómico y pueden replicarse y moverse de forma independiente.

La enzima que realiza la función de transposición suele estar codificada por un transposón. Reconoce las secuencias específicas en ambos extremos del transposón y puede separar el transposón de la secuencia adyacente y luego insertarlo en una nueva diana de ADN. Sitio, sin requisito de homología.

Los transposones incluyen secuencias repetidas invertidas en ambos extremos y un gen transponible en el medio. La secuencia repetida invertida es donde se une la transposasa, y el gen transponible en el medio es el segmento genético que salta de un gen a otro.

Tn5 tiene una longitud total de aproximadamente 5,8 kb y consta de una secuencia central que codifica tres antibióticos (neomicina, bleomicina y estreptomicina) y dos secuencias IS50 invertidas, de las cuales IS50R e IS50L son altamente homólogas. con una sola base de IS50L mutada. IS50 tiene un extremo invertido de 19 pb (extremo exterior, OE y extremo interior, IE). Los dos extremos invertidos son diferentes en 7 pb. Este extremo invertido es el sitio de acción de la transposasa (Tnp). Tanto IS50L como IS50R contienen genes que codifican la transposasa (TnP) y la proteína represora de transposición (lnh). Sin embargo, debido a la mutación de la base en IS50L, la traducción finaliza prematuramente, por lo que solo IS50R puede producir TnP y lnh activos normales.

Cuando se produce la transposición, dos moléculas de transposasa se unen a los extremos OE del transposón Tn5 para formar dos complejos Tnp-OE. Posteriormente, los dos complejos se asocian y los extremos interactúan y se escinden para formar un complejo sinaptonémico. Compuesto por una proteína dimérica y dos moléculas de ADN. Sólo después de la formación del complejo sinaptonémico el Tnp tiene la actividad de cortar el ADN. La formación de esta estructura favorece la escisión y transferencia coordinadas de la cadena de ADN Tn5 y ayuda a evitar que Tnp corte solo un extremo de la cadena de ADN del transposón. El Tnp unido al extremo izquierdo es responsable de catalizar la hidrólisis del enlace fosfodiéster en el extremo derecho, mientras que el Tnp unido al extremo derecho es responsable de catalizar la hidrólisis del enlace fosfodiéster en el extremo izquierdo. Al activar las moléculas de agua Tn p, esta molécula de agua activada hidroliza la cadena de ADN, formando dos grupos nucleofílicos 3'-OH en ambos extremos de Tn5. Los grupos nucleofílicos luego atacan la cadena complementaria para formar una estructura en horquilla. Luego, otra molécula de agua activada hidroliza la estructura en horquilla para formar Tn5 de extremos romos, y todo el complejo sinaptonémico abandona la hebra donante y se une al ADN objetivo. El 3'-OH de Tn5 ataca nucleófilamente a la secuencia objetivo, formando un extremo pegajoso de 9 pb entre el sitio de inserción del transposón, y se forma una valencia positiva entre el 3'-OH del transposón y el 5'-P del ADN objetivo. , el transposón se inserta en la secuencia objetivo. El espacio se llena bajo la acción de la ADN polimerasa y se forma una secuencia de repetición directa de 9 pb en ambos extremos del transposón. Todo el proceso de transposición completa el proceso de cortar genes del ADN original y luego pegarlos en el ADN de otro receptor, logrando un "salto" genético (en la foto).

ATAC-seq, también conocido como ensayo de cromatina accesible por transposasa con secuenciación de alto rendimiento, es una tecnología de secuenciación de alto rendimiento que utiliza transposasa para explorar la cromatina accesible.

上篇: Explicación detallada del proceso de solicitud de patente de invención nacional 2018. Mucha gente no entiende muy bien por qué solicitamos patentes. Por un lado, podemos utilizar las leyes de patentes para proteger nuestras invenciones de ser imitadas y robadas por otros durante su implementación. Por otro lado, puede utilizarse para inversiones y las patentes pueden utilizarse como armas para aumentar la ventaja competitiva de las empresas en la economía de mercado. Hoy les traeré una introducción detallada al proceso de solicitud de patente de invención nacional en 2018. Introducción detallada al proceso nacional de solicitud de patentes de invención en 2018. De acuerdo con lo dispuesto en la Ley de Patentes, el proceso de aprobación de solicitudes de patentes de invención se divide en cinco etapas: aceptación, examen preliminar, publicación, examen de fondo y autorización: (1) Etapa de aceptación, la oficina de patentes recibe la revisión de la solicitud de patente. Si la solicitud cumple con las condiciones de aceptación, la Oficina de Patentes determinará la fecha de la solicitud, dará el número de solicitud y, después de verificar la lista de documentos, emitirá un aviso de aceptación para informar al solicitante. Los documentos de solicitud no están impresos, impresos, borrosos o alterados o los dibujos y fotografías no están dibujados con herramientas de dibujo y tinta negra, y las fotografías están borrosas o alteradas o los documentos de solicitud están incompletos o el nombre del solicitante; no conocido en la solicitud, la dirección o las categorías de solicitud de patente no están claras o son inciertas, y no se aceptarán las solicitudes de patente enviadas directamente por entidades e individuos extranjeros sin pasar por una agencia de patentes relacionada con el extranjero. (2) Si una solicitud de patente aceptada en la etapa de examen preliminar paga la tasa de solicitud de acuerdo con las regulaciones, automáticamente entrará en la etapa de examen preliminar. Antes del examen preliminar, la solicitud de patente de invención debe someterse primero a un examen de confidencialidad. Si se requiere confidencialidad, se tramitará de conformidad con los procedimientos de confidencialidad. En el examen preliminar, es necesario examinar si existen defectos obvios en la solicitud, incluyendo principalmente si el contenido del examen cae dentro del alcance de la ley de patentes que no otorga derechos de patente, si la evidente falta de contenido técnico no puede constituye una solución técnica, si carece de unidad, si los documentos de la solicitud están completos y si el formato cumple con los requisitos. Si es un solicitante de fuera de la ciudad, debe realizar una revisión de calificación y una revisión de los procedimientos de solicitud. Si la solicitud no está calificada, la Oficina de Patentes notificará al solicitante para que haga correcciones o declaraciones dentro del plazo especificado. Si no se recibe respuesta dentro del plazo, la solicitud se tendrá por desistida. Si los defectos no se eliminan después de la respuesta, la mercancía será rechazada. Si la solicitud de patente de invención pasa el examen preliminar, se emitirá un aviso de calificación del examen preliminar. Además de la revisión anterior, las solicitudes de patentes de modelos de utilidad y diseños también deben revisarse para ver si son obviamente las mismas que las patentes existentes, no son nuevas soluciones técnicas o nuevos diseños, y no se encuentran motivos para el rechazo después de una revisión preliminar. Las instrucciones de autorización se ingresarán directamente. (3) Etapa de publicación La solicitud de patente de invención entra en la etapa de publicidad a partir de la fecha de emisión del aviso de calificación del examen preliminar. Si el solicitante no presenta una solicitud de divulgación anticipada, el proceso de preparación de divulgación no se iniciará hasta 18 meses después de la fecha de solicitud. Si el solicitante solicita una divulgación anticipada, la solicitud entrará inmediatamente en el proceso de preparación de la divulgación. Después de revisar el formato, editar y corregir, procesar por computadora, componer e imprimir, aproximadamente tres meses después, se publicó el resumen de la especificación en el "Patent Gazette" y se publicó un folleto de la especificación. Una vez publicada la solicitud, el solicitante tiene derecho a protección temporal. (4) Después de que se publique la solicitud de patente de invención en la etapa de examen de fondo, si el solicitante presenta una solicitud de examen de fondo y la solicitud ha surtido efecto, el solicitante entrará en el procedimiento de examen de fondo. Si el solicitante no presenta una solicitud de examen de fondo dentro de los tres años siguientes a la fecha de la solicitud, o la solicitud de examen de fondo no ha surtido efecto, la solicitud se considerará retirada. Durante el proceso de prueba real, se llevará a cabo una revisión exhaustiva para determinar si la solicitud de patente cumple con las condiciones de novedad, creatividad, practicidad y otras condiciones sustantivas estipuladas en la ley de patentes. Luego de la revisión, si se determina que la solicitud no cumple con las condiciones de autorización o tiene diversos defectos, se notificará al solicitante para que exprese sus opiniones o realice modificaciones dentro del tiempo especificado. Si no hay respuesta dentro del plazo, la solicitud se considerará desistida. Si después de múltiples respuestas la solicitud aún no cumple con los requisitos, la solicitud será rechazada. El período de prueba real es muy largo. Si la solicitud no es autorizada dentro de los dos años siguientes a la fecha de la solicitud, se pagará una tarifa de mantenimiento de la solicitud anualmente a partir del tercer año. Si no se realiza el pago dentro del plazo previsto, se considerará desistida la solicitud. Si durante la revisión de fondo no se encuentra motivo de rechazo, se iniciará el procedimiento de autorización de conformidad con la reglamentación. (5) Durante la etapa de autorización, si las solicitudes de patente de modelo de utilidad y diseño han sido examinadas preliminarmente, y si no se encuentra ningún motivo para el rechazo en la solicitud de patente de invención después de un examen sustancial, el examinador preparará un aviso de autorización y solicitará el registro de autorización. . La Oficina de Patentes examinará la validez legal y la integridad del texto de autorización, revisará y modificará los elementos de descripción de la solicitud de patente y luego emitirá un aviso de autorización y un aviso de formalidad de registro. Después de recibir la notificación, el solicitante debe realizar los procedimientos de registro de acuerdo con los requisitos de la notificación y pagar las tasas prescritas en un plazo de dos meses. Si los procedimientos de registro se completan a tiempo, la Oficina de Patentes concederá el derecho de patente, emitirá un certificado de patente, lo inscribirá en el registro de patentes y lo anunciará en el Boletín de Patentes dos meses después. La no realización de los trámites de registro conforme a la normativa se considerará como renuncia al derecho a obtener derechos de patente. Lo anterior es la respuesta detallada de la introducción detallada del editor al proceso de solicitud de patente de invención nacional de 2018. Para más preguntas sobre solicitudes de patentes, consulte Propiedad Intelectual de Bajie. 下篇: ¿Qué enlaces se pueden colocar en la página de inicio de la cuenta de TikTok en el extranjero de "Seaweed Cross-border"? (Danza de algas Tik Tok)