[Muestreo microbiano de salud pública. Resumen de métodos de detección] Métodos de detección microbiana en agua.

1. Método de detección de microorganismos en el aire------Número total de bacterias

(Agar nutricional, autoclavado a 121°C durante 20 minutos, tiempo de cultivo a 37). °C, 48h)

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1. Dos métodos

(1) Método de impacto (muestreador microbiano de nivel dos o nivel seis)

( 2) Método de sedimentación natural (exposición durante 5 minutos)

Muestreo: puntas de flor de ciruelo, altura: 1,2 ~ 1,5 m, distancia desde la pared: 1 m;

2. Métodos de prueba microbiana para juegos de té

(1) Número total de bacterias

1. Método de preparación de solución salina fisiológica: Disolver cloruro de sodio (8,5 g ) en agua destilada (1000 ml), dispensar en tubos de ensayo, 10 ml por tubo, y esterilizar en autoclave a 121 °C durante 20 minutos.

2. Muestreo: humedecer un bastoncillo de algodón con suero fisiológico, aplicar 50cm2 en los bordes interior y exterior del juego de té, es decir, un círculo (1~1,5cm) donde contactan los labios, y utilizar Tijeras esterilizadas para cortar el contacto con la mano del hisopo de algodón, coloque el hisopo de algodón en 10 ml de solución salina fisiológica y envíelo para inspección dentro de las 4 horas.

3. Procedimiento de inspección:

Inspeccionar la muestra → Añadir 1 mL cada una a dos placas estériles (si la contaminación es grave, se puede diluir en incrementos de diez veces) → 37°C , cultivo de 48h → recuento de colonias →Informe

4. Unidad: ufc/cm2.

(2) Coliformes

1. Medio de cultivo: medio de cultivo de fermentación de lactosa y sales biliares (material doble, 10 mL por tubo, autoclavado a 115°C durante 15 minutos)

2. Método de detección: método de fermentación (11 páginas del libro de texto para contenido específico)

3. Inspección de muestra (la muestra restante para determinar el número total de bacterias)

4. Proceso de tinción de Gram: (las bacterias positivas aparecen moradas, las bacterias negativas aparecen rojas)

(1) Teñido inicial: 1 minuto, lavar con agua

(2) Yodo; teñido: 1 minuto, lavar con agua;

(3) Decoloración: 30 s, lavar con agua

(4) Contratinción: 1 min, lavar con agua, esperar hasta que se seque; inspeccionar bajo el microscopio.

5. Informe de resultados: Si el tubo de fermentación de lactosa finalmente produce ácido y gas, y la tinción de Gram es negativa para bacterias no bacilos, se puede informar la detección de bacterias coliformes.

3. Métodos de detección microbiana de toallas y ropa de cama

(1) Número total de bacterias

1. Muestreo

(1 ) Toallas, Funda de almohada: 25 cm2 en el centro de cada lado después de doblar por la mitad

(2) Sábanas y edredones: Aplicar de ida y vuelta en el centro 25 cm2 de las partes superior e inferior

2. El procedimiento de prueba es el mismo que la prueba de recuento bacteriano total en juegos de té.

3. Unidad de cálculo: ufc/25 cm2.

(2) Coliformes (el procedimiento de prueba es el mismo que la prueba de coliformes en el juego de té)

1. Método de frotis: (use muestras recolectadas al medir el número total de bacterias)

4. Métodos de prueba microbiana para utensilios de peluquería

(1) Coliformes

1. Muestreo

Cortauñas: Distribuidas uniformemente en las partes superior e inferior del frente de las maquinillas Aplicar tres veces cada uno;

Peluqueros, tijeras y herramientas de pedicura: Aplicar una vez a ambos lados del cuchillo y las tijeras utilizadas para el muestreo; dos cuchillos o dos tijeras constituyen una muestra.

2. Verter 5 mL de la muestra problema en el tubo de fermentación de lactosa y sales biliares de doble material, cultivarlo a 37°C durante 24 horas.

3. Cultivo de aislamiento: inocular la placa de eosina azul de metileno y realizar microscopía de tinción de Gram;

4. Prueba de confirmación: inocular tubos de fermentación de lactosa a 37°C, cultivar durante 24 horas y observar la producción de gas.

5. Informe de resultados: Las bacterias libres de bacilos que eventualmente producen ácido y gas en el tubo de lactosa y son negativas para la tinción de Gram se pueden reportar como coliformes positivas.

(2) Staphylococcus aureus

1. Medio de cultivo: caldo de cloruro sódico al 7,5% o caldo de cultivo triptona de soja

2. Pasos:

(1) Verter los 5 ml restantes de bacterias coliformes en el medio de cultivo y cultivarlo a 37 °C durante 24 horas.

(2) Inocular la placa de sangre, 37 °C, cultivar; durante 24 horas; observe la forma: superficie redonda, amarilla dorada, convexa y lisa, y círculo de hemólisis

(3) Elija colonias para examen microscópico: Gram positivas (rojas), disposición en forma de uva; ;

(4) Prueba de fermentación de manitol: inocular en medio de fermentación de manitol, cultivar a 37 °C durante 24 horas y observar si se produce ácido;

(5) Prueba de coagulasa plasmática

Método en portaobjetos: En ambos lados de un portaobjetos de vidrio limpio, dejar caer una gota de solución salina fisiológica en un extremo y una gota de plasma en el otro extremo. Inocular las colonias recogidas con anillo y mezclarlas respectivamente. Si no hay fenómeno de coagulación después de 5 minutos, es negativo, si hay coágulos granulares en el plasma pero no en la solución salina normal, es positivo;

5. Métodos de prueba microbiana para zapatillas

Moho y levadura

(Se deben añadir perlas de vidrio al suero fisiológico)

1 Base de cultivo: medio de cultivo de moho, (rojo tigre), medio de cultivo rojo de Bengala, medio de agar dextrosa de papa (PDA)

2. Muestreo: use hisopos de algodón en el punto de 5 cm donde la parte superior de cada zapatilla entra en contacto con la superficie. dedos de los pies. Aplicar 3 veces uniformemente en un área de p> 4. Cultivo: En una incubadora de moldes a 25~28°C, cultivar y observar durante una semana.

5. La unidad es ufc/50cm2.

6. Pruebas microbianas de bañeras y lavabos para la cara (pies)

(1) Número total de bacterias

Solución salina estéril: 125 ml/botella para muestreo de bañera; 50 ml para muestreo de cuenca de cara (pies). Sitio de muestreo: entre la mitad y un tercio de la altura dentro del lavabo;

Puntos de distribución: manchas de flor de ciruelo en la bañera; manchas en los lados opuestos del lavabo de la cara (pies);

Método: método de untar (consistente con el método del juego de té)

Unidad: ufc/25cm2.

(2) Bacterias coliformes (igual que el juego de té)

7. Pruebas microbianas del agua de la piscina

(1) Número total de bacterias

1. Frasco de muestra: recipiente de vidrio libre de ácidos, álcalis y no tóxico.

2. Antes de la esterilización, agregue una cantidad suficiente de solución de tiosulfato de sodio al 10%, generalmente 0,1 ml por cada 125 ml de muestra de agua.

3. Muestreo

4. Pasos de operación (igual que el número total de bacterias en el juego de té)

(2) Coliformes

1. Medio de cultivo: medio de cultivo de lactopeptona tres veces concentrado (la cantidad de agua destilada permanece sin cambios y los demás ingredientes se triplican)

2. Pasos

(1) Prueba especulativa

Agregue 100 ml de muestra de agua a cada uno de los 2 tubos de ensayo grandes (que contienen tubos de ensayo pequeños) que contienen 50 ml de solución de cultivo de lactopeptona triple concentrada; agregue 10 tubos de ensayo que contengan 5 ml de solución de cultivo de lactopeptona triple concentrada ( que contiene pequeños tubos de ensayo) tubo de ensayo) y agregue 10 ml de muestra de agua. Agitar bien y cultura.

(2) Aislamiento en placa

Inocular con eosina azul de metileno, cultivar y observar; morfología típica de la colonia: negro violeta o rojo violeta, con brillo metálico.

(3) Test de fermentaciones múltiples

Realizar tinción de Gram, inocular el tubo de fermentación de lactosa, cultivar y observar.

(4) Consulta la tabla: Valor NMP de bacterias coliformes en una muestra de agua de 1000mL.

8. Métodos de prueba microbiana para agua potable

(1) Muestreo

1. Los recipientes para muestras deben estar hechos de plástico de polietileno limpio, incoloro y no tóxico. y vidrio duro (también conocido como vidrio de borosilicato). La botella de muestra debe ser una botella dedicada y las botellas que contengan soluciones demasiado concentradas en el laboratorio no deben usarse como botellas de muestra. Por lo general, utilizamos botellas de boca estrecha esterilizadas en autoclave de 500 ml para el muestreo.

2. Los recipientes, tapones y tapas deben poder soportar temperaturas de esterilización.

3. Todos los suministros utilizados en la inspección deben estar completamente esterilizados.

Antes de la esterilización, se deben lavar minuciosamente, esterilizar con vapor a alta presión a 121°C durante 20 minutos o hornear en seco a 160°C durante 2 horas.

4. Refrigere y pruebe dentro de las 4 horas siguientes. Si hay cloro residual libre, se deben agregar 0,1 ml de solución de tiosulfato de sodio a cada 125 ml de la botella de muestreo antes de la desinfección.

(2) Número total de bacterias (los pasos de operación son los mismos que los del juego de té, recuerda hacer un control en blanco)

(3) Coliformes totales

1. Prueba de fermentación de lactosa

(1) Se añaden 10 ml de muestra de agua a un tubo de fermentación de lactosa de doble material de 10 ml; se añade 1 ml de muestra de agua a un tubo de fermentación de lactosa de un solo material de 0,1 ml; se añade la muestra a un tubo de fermentación de lactosa de un solo material de 10 ml; cada dilución se inocula 5 tubos.

(2) Cultivar a 37°C durante 24 horas y observar el fenómeno de producción de ácido y gas

2. Cultivo de aislamiento (inocular con eosina azul de metileno y cultivo)

3.Experimentos de confirmación (tinción de Gram, microscopía, inoculación de tubos de fermentación de lactosa)

4. Aplicación de resultados: consultar la tabla.

(4) Coliformes resistentes al calor

1. Medio de cultivo: medio de cultivo EC

2. Pasos de operación: Igual que el método de fermentación multitubo para coliformes.

3. Temperatura del cultivo: 44,5°C durante 24 horas.

(5) Escherichia coli

1. Medio: medio EC-MUG (después de calentar y disolver el medio, verifique la fluorescencia bajo luz violeta de 366 nm)

2. Temperatura de cultivo: 44,5°C durante 24 horas.

3. Observación: utilice una lámpara UV de 366 nm en un lugar oscuro para ver si se produce fluorescencia azul.

4. Calcule el número de tubos positivos y consulte la tabla para obtenerlo; el número más probable. Los resultados se informan como MPN/100 ml.

9. Sistema de aire acondicionado centralizado en lugares públicos

(1) Legionella pneumophila en agua condensada y agua de refrigeración

(1) Muestreo

1. Contenedor de muestra: Puede elegir frascos de vidrio, frascos de polietileno, frascos de boca ancha y esterilizar antes de su uso.

2. Volumen de muestreo: Cada punto de muestreo toma aproximadamente 500 ml de muestras de agua (o muestras de sedimentos, lodos blandos, etc.) según procedimientos asépticos.

3. Neutralización: Para muestras que han sido esterilizadas con cloro u ozono, añadir solución de tiosulfato de sodio para neutralizar el recipiente de muestra antes de esterilizarlo.

4. Transporte y almacenamiento de la muestra: Lo mejor es entregar la muestra al laboratorio en un plazo de 2 días. No es necesario congelarla, pero sí debe protegerse de la luz y el calor. almacenado a temperatura ambiente durante más de 15 días.

(2) Tratamiento térmico: Tomar 1ml de la muestra eluida y calentarlo en un baño de agua a 50°C durante 30 minutos.

Tratamiento ácido: Tomar 5ml de muestra eluida, ajustar el pH a 2,2, agitar suavemente y dejar actuar 5 minutos.

(3) Colocar la placa inoculada en una incubadora de CO2 con una concentración del 2,5% a 35~37°C. Cuando se observe formación del cultivo, invertir la placa e incubar durante 10 días, prestando atención a la hidratación. .

(4) Observación

La Legionella crece lentamente y otras bacterias la cubren fácilmente, por lo que es necesario observarla con un estereoscopio todos los días. Las colonias de Legionella tienen varios colores, generalmente blanco, gris, azul o morado, pero también pueden aparecer de color marrón oscuro, gris verdoso o rojo oscuro. Las colonias son limpias, de superficie lisa, con la típica forma de vidrio esmerilado y algunas son fluorescentes. bajo luz ultravioleta.

(2) Número total de bacterias en el suministro de aire

Utilice un funcionamiento aséptico, utilice un muestreador de impacto de aire de malla de seis etapas y utilice un flujo de aire de 28,3 l/min a el punto de muestreo Recoja durante 5~15min. Coloque la placa de agar nutritivo de la que se recogieron las bacterias, cultívela a 35-37 °C durante 48 horas y cuente el número de colonias.

(3) Número total de hongos en el suministro de aire

El método de muestreo es el mismo que el anterior. Coloque la placa de agar Sabouraud después de recolectar los hongos y cultívela a 28°C. durante 5 a 7 días Obsérvelo día a día y recójalo el primer día. 7 d Registre los resultados. Si la cantidad de hongos es demasiado grande, cuente los resultados el quinto día, registre el tiempo de cultivo y conviértalo en ufc/m3.

(4) Estreptococo β-hemolítico en el suministro de aire

Forma pequeñas colonias de superficie convexa de color blanco grisáceo con un diámetro de 0,5 mm a 0,7 mm en la placa de agar sangre. y las colonias son transparentes o translúcidas, la superficie es lisa y opalescente, y hay un anillo hemolítico alrededor de la colonia. El examen microscópico muestra bacilos no Gram positivos, redondos u ovalados, dispuestos en cadena;

(5) Inspección microbiana de la superficie interior del conducto de aire

Zona de muestreo: El área de muestreo en cada punto debe ser de 50cm2.

Método de muestreo: método de raspado, método de limpieza

Los métodos de cultivo y recuento de bacterias y hongos son los mismos que los anteriores