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Los anticuerpos de referencia internos mitocondriales, los controles internos de proteínas celulares totales comúnmente utilizados incluyen GAPDH y proteínas citoesqueléticas β-actina o β-tubulina, etc. Para algunas muestras de plantas, se requiere actina vegetal especial como control interno. Cuando la muestra experimental es solo proteína nuclear en lugar de extracto de proteína celular total, se puede utilizar la histona H o el antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA) como anticuerpo de referencia nuclear.
Sin embargo, en algunos proyectos de investigación especiales dirigidos al microambiente de las mitocondrias, es necesario extraer la proteína mitocondrial total y detectar el contenido de proteína objetivo. En este momento, la referencia interna de proteína celular total convencional no es adecuada. Recomendamos utilizar un anticuerpo de referencia interno para las proteínas mitocondriales totales. Para la detección de proteínas mitocondriales, se utilizan habitualmente COX IV o VDAC1 como anticuerpos de referencia interna, entre los cuales la COX IV es la referencia interna mitocondrial más citada. El peso molecular de detección de COX IV es de aproximadamente 16 kD, lo que es más adecuado para detectar proteínas objetivo en experimentos de WB a gran escala.
Aplicación:
La citocromo c oxidasa es un heterooligosacárido que suele contener 13 subunidades. Se encuentra en la membrana interna de las mitocondrias y es un complejo enzimático de la cadena respiratoria mitocondrial. Las tres subunidades más grandes de la citocromo c oxidasa, que forman el centro catalítico, están codificadas por el ADN mitocondrial, y las 10 subunidades restantes, incluida la COX IV, están codificadas por el ADN genómico del núcleo. La deficiencia de la actividad del citocromo c oxidasa (COX) se asocia con muchas enfermedades humanas.
El anticuerpo COX IV se puede utilizar como anticuerpo de referencia interno para la carga de proteínas mitocondriales, y el tamaño de su proteína objetivo detectada es de aproximadamente 16 kD.