Digestión de enzimas de restricción de ADN [reactivos y equipos]

1． Reactivos

(1) Endonucleasas de restricción: como EcoRI, Hind III, PstII, BamH1, etc., almacenadas a -20°C.

(2) Muestra de ADN: como λDNA, pBR322, etc., almacenadas a -20°C.

(3) Preparación de tampón de endonucleasa de restricción, consulte la tabla siguiente (preparar con agua bidestilada esterilizada, almacenar a -20 °C).

(4) Electroforesis 10× TBE); tampón: 0,89 mol/l de Tris; 0,89 mol/l de ácido bórico; 0,02 mol/l de EDTA Na2, pH 8,0, esterilizado a alta temperatura, almacenado a 4°C.

(5) Tampón de carga 6x: 0,25 % de azul de bromofenol; 40 % de sacarosa; preparado con agua bidestilada esterilizada y almacenado a 4 °C.

(6) Solución de bromuro de etidio: Pesar 5 mg de bromuro de etidio y disolverlo en 1 ml de agua bidestilada esterilizada y conservar en la oscuridad a 4°C.

(7) Desinfectar agua bidestilada.

2. Equipo

Caja de agua a temperatura constante; aparato de electroforesis; tanque de electroforesis horizontal; pipeta ajustable de 50 μl (Fábrica de fabricación de instrumentos bioquímicos de Shanghai Kanghua).