Detección de células Th extracelulares de células Th

Detección de citocinas extracelulares: detecta principalmente citocinas en plasma (suero) y otros líquidos, y mide citocinas en plasma (suero). Puede reflejar con precisión el estado de expresión de las citocinas. Ciertas muestras de fluidos corporales, como el líquido cefalorraquídeo, el líquido del tejido sinovial, el líquido del lavado bronquial, el líquido torácico y ascítico, etc., están directamente relacionados con enfermedades específicas. El principio básico de la citometría de flujo (FCM) es utilizar estimuladores PMA e ionomicina (ionomicina) para activar los linfocitos in vitro, y utilizar inhibidores del transporte de proteínas como la monensina para evitar que las citoquinas se secreten fuera de las células, el modo de transporte de proteínas intracelular. alterado, lo que hace que las citocinas se acumulen en el cuerpo de Golgi, y las citocinas mejoradas pueden medirse con citometría de flujo. El desarrollo de esta tecnología permite resolver en pocas horas preguntas que antes tardaban meses en responderse mediante la clonación de células T. Esta tecnología se ha convertido en un método de análisis estándar para detectar la producción de citocinas a nivel de células individuales. Aunque la tecnología de citometría de flujo de etiquetado de citocinas tiene ventajas incomparables sobre otros métodos, durante la operación, las células deben ser estimuladas, bloqueadas y fijadas, penetradas y marcadas. , cualquier vínculo afectará los resultados experimentales [8]. El indicador de detección comúnmente utilizado en citometría de flujo es el análisis FCM basado en la puerta CD4. El porcentaje de células TH1/TH2 se determinó mediante la expresión de IFN-γ e IL-4 en células CD4+ [9-10]. Configure la puerta con CD3/CD8 y use FCM para detectar y analizar la tasa de expresión de las células TH1/TH2. Los resultados son precisos y confiables, y la operación es conveniente y rápida. Es un método ideal para detectar células TH1/TH2. 11-12]. En los últimos años, se ha descubierto que las células T CD4+ están polarizadas en diferentes direcciones y expresan diferentes receptores de quimiocinas en la superficie celular. El receptor de quimiocinas CCR5 se expresa principalmente en la superficie de las células TH1 y es un marcador específico de las células TH1. ], por lo tanto, el uso de anticuerpos monoclonales específicos contra receptores de quimiocinas para medir diferentes subgrupos de TH tiene mayor especificidad y es más sencillo de operar. Los anticuerpos CCR5 y CCR3 se desarrollaron recientemente, pero sólo pueden reflejar cambios en el número de células TH, que no son consistentes con cambios en la función (secreción de citoquinas) y requieren más investigación.