Características y explicaciones de la PCR en un solo paso

◎La transcripción inversa y la PCR cuantitativa se pueden completar en un tubo de reacción en un solo paso, lo que hace que la operación sea simple y rápida;

◎Utilizando polimerasa de arranque en caliente químicamente modificada, la reacción es altamente específico y evita eficazmente la amplificación no específica;

◎El tampón de reacción está completamente optimizado y tiene una alta sensibilidad. Puede detectar el fragmento objetivo en tan solo 1 pg de ARN total, lo que es especialmente adecuado para Detección de ARN de baja copia.

◎ Agregar los ingredientes activos patentados de EMI RT-PCR puede aumentar significativamente el rendimiento de la RT-PCR. Los valores de CT generalmente son de 3 a 5 ciclos antes y la curva en forma de S es más típica.

Descripción: 1. ¿BIOGHSC? ¿súper? La mezcla de la sonda contiene mezcla de dNTP y Mg2+, ¿BIOGHSC? ¿súper? La mezcla de enzimas contiene transcriptasa súper inversa BIOG, polimerasa de arranque en caliente BIOG y luciferina. 2. En términos generales, la concentración final de cebadores en el sistema de reacción es de 0,3 μM, lo que puede lograr mejores efectos de amplificación. Cuando los resultados de la reacción no son ideales, la concentración del cebador se puede ajustar dentro del rango de 0,1 a 1,0 μm. 3. La concentración final de la sonda TaqMan se puede ajustar entre 0,1 micras y 0,45 micras. 4. La qPCR tiene una alta sensibilidad y la precisión de la cantidad de la plantilla tiene un gran impacto en los resultados. Se recomienda añadir la plantilla después de una dilución moderada, o utilizar 50? lSistema de reacción. 5. El volumen de la plantilla no debe exceder el 10% del volumen de reacción. 6. Elija una longitud del producto de amplificación dentro del rango de 100 pb-500 pb, preferiblemente 100-200 pb. ? 7. Al preparar el sistema de reacción, evite agitar vigorosamente para evitar la generación de burbujas. 8. Condiciones de reacción: reacción de transcripción inversa a 42 °C durante 15 minutos, calentamiento a 95 °C durante 5 minutos para activar la ADN polimerasa de arranque en caliente y luego calentamiento a 95 °C. ¿15 segundos, 60 ℃? 35 segundos, 35-40 ciclos. Las condiciones de reacción se pueden ajustar apropiadamente según el tamaño del fragmento diana y el valor de Tm del cebador. 8. Si la plantilla tiene una estructura secundaria compleja, la temperatura de reacción se puede aumentar a 55°C, lo que ayudará a mejorar el rendimiento.