Red de conocimiento del abogados - Preguntas y respuestas penales - ¿Qué es la PCR en gradiente? Para una reacción de PCR, aunque existen varios software de diseño de cebadores de PCR o fórmulas empíricas para calcular la temperatura de recocido óptima, debido a las combinaciones siempre cambiantes de bases en la plantilla, los datos obtenidos por la fórmula empírica Puede que no sea exacto para fragmentos especiales. No es "P". Un ligero cambio puede tener un impacto decisivo en el resultado, por lo que la "condición de sentimiento" alguna vez fue un dolor de cabeza. La aparición de la PCR en gradiente resuelve parcialmente algunos problemas: durante el proceso de reacción, las condiciones de control de temperatura de cada pocillo se pueden cambiar de acuerdo con el gradiente dentro de un rango específico, y las condiciones de reacción más adecuadas se pueden encontrar en un solo paso según los resultados. . No solo se puede optimizar la temperatura de hibridación, sino también la temperatura de desnaturalización y la temperatura de extensión; esto es muy importante para la amplificación con la mayoría de las enzimas Taq de alta fidelidad, como Invitrogen, Clontech y Promega, ya que las temperaturas de reacción óptimas de Taq y las enzimas de corrección pueden difieren significativamente, por lo que optimizar la temperatura de extensión es muy importante. Se pueden completar múltiples experimentos en un instrumento, lo que no solo ahorra tiempo experimental, mejora la eficiencia, sino que también ahorra costos experimentales. Para los instrumentos de PCR con funciones de gradiente, es necesario considerar la uniformidad y precisión de la temperatura entre diferentes tubos de gradiente en el modo gradiente, y si el instrumento tiene las mismas características de temperatura en el modo gradiente y en el modo estándar. Esta diferencia puede contribuir a la diferencia entre las condiciones óptimas obtenidas en el modo gradiente y los resultados obtenidos solo en el modo estándar. La tecnología SteadySlope es una patente de tecnología de PCR en gradiente propiedad de eppendorf, que puede alcanzar todas las temperaturas de gradiente establecidas con la misma tasa de cambio de temperatura, por lo que es termostática en modo gradiente. Esta tecnología garantiza una transferencia de información confiable entre el modo gradiente y el modo normal sin cambios en el rendimiento y la especificidad debido a diferentes características de temperatura. MJ optó por utilizar diferentes velocidades de enfriamiento en el modo gradiente sin pagar regalías, y el perfil de temperatura entre cada temperatura gradiente también es diferente, por lo que cambiar del modo gradiente al modo normal puede ser problemático. Además, el instrumento de PCR de gradiente que utiliza tecnología TCT (tres bucles) agrega áreas de control de calentamiento y enfriamiento en el modo de PCR de gradiente, lo que garantiza la precisión del control de temperatura del gradiente y mejora la uniformidad de la temperatura entre diferentes tubos de gradiente. Al agregar un módulo de PCR in situ al instrumento de PCR, se puede realizar la amplificación de PCR in situ en un portaobjetos de vidrio. Tanto los instrumentos de PCR MJ como eppendorf ofrecen adaptadores in situ para satisfacer diferentes necesidades. Para los trabajadores que se dedican a la investigación médica, vale la pena comprar un instrumento de PCR equipado con un módulo que admita la PCR in situ. Además, con la creciente demanda de investigación cuantitativa genómica de paso alto, varias marcas han lanzado instrumentos de PCR cuantitativa de paso alto multicanal, cada uno con sus propias especialidades: MJ tiene un tipo uno por cuatro, que es un host 1 con cuatro ranuras de amplificación, cada tanque puede controlarse la temperatura de forma independiente y puede PCR 96 x 4 muestras a la vez, pero si ocurre un problema, no se pueden usar los cuatro. Basado en el 9700 original, ABI ha lanzado una base dual de 384 orificios, que puede completar muestras de 384x2 a la vez, lo que permite ampliar la función del 9700 al campo de medición de Qualcomm sin comprar una nueva máquina. Desafortunadamente, los dos tanques 384 no pueden tener control de temperatura independiente.