¿Por qué el ADN es relativamente puro después de la clonación tac?
Por qué el ADN es relativamente puro después de la clonación tac
Para múltiples aplicaciones de biología molecular y genómica, desde la clonación y la PCR hasta la secuenciación del genoma y el análisis de chips, la purificación del ADN es un camino necesario. Sin embargo, elegir el mejor kit de depuración no es fácil. Por ejemplo, cuando se purifica ADN genómico, se necesita un kit que maneje los ácidos nucleicos con cuidado sin aislar el ADN plasmídico. Además, la tecnología de secuenciación de próxima generación impone requisitos muy elevados a las muestras y también necesitamos algunos productos especializados para purificar el ADN. Aquí presentamos algunas opciones nuevas.
Método de precipitación con sal
El kit de purificación de ADN completo MasterPure® de Epicentre (una empresa de Illumina) utiliza un método patentado de precipitación con sal. Esta serie de kits cubre una variedad de tipos de muestras, incluida sangre, tejido fijo, plantas, levaduras, insectos, etc., y puede generar altos rendimientos de ácidos nucleicos en solo 30 minutos con una pérdida mínima.
Según Cristine Kinross, gerente senior de productos de Epicentre, con estos kits, los usuarios no necesitan realizar una purificación adicional antes de la preparación de muestras para secuenciación u otras aplicaciones de biología molecular. Eliminan proteínas y otros desechos celulares sin introducir compuestos tóxicos que deban eliminarse, eliminando así múltiples lavados y mejorando la producción de ácido nucleico.
Kinross dijo: "La excelente pureza de los ácidos nucleicos recuperados utilizando MasterPure permite que las muestras se introduzcan directamente en la preparación de la biblioteca de secuenciación". Por supuesto, también es adecuado para otras aplicaciones, incluidas microarrays, qPCR y clonación. Además, este kit también se puede utilizar para la purificación de ARN. Después de obtener el ácido nucleico total, se puede obtener ARN total después del tratamiento con ADNasa.
Variedad de kits
Promega ofrece una amplia gama de kits de purificación de ácidos nucleicos que emplean varias estrategias diferentes. Por ejemplo, el kit de purificación de ADN genómico Wizard® se basa en el método de precipitación clásico y puede extraer ADN genómico de sangre completa, células de cultivo de tejidos, tejidos animales y vegetales, levaduras y bacterias, lo cual es flexible y eficiente, mientras que la serie ReliaPrep®; Los kits utilizan métodos de extracción de columnas, sencillos y rápidos. Además, Promega también ofrece kits de purificación basados en perlas magnéticas.
Eric Vincent, gerente global de productos genómicos de Promega, dijo: "Aunque la composición exacta de la solución variará, el proceso básico de lisis, unión, lavado y elución es aplicable a diferentes métodos de unión (como como gel de sílice) o celulosa), diferentes formatos de purificación (columnas de purificación o perlas magnéticas) y operaciones de purificación manuales y automatizadas "Para algunos tipos de muestras muy importantes (como las muestras FFPE), también se requieren algunas operaciones o procesamientos especializados.
“Desarrollamos tampones de unión/lavado únicos que eliminan eficazmente sustancias que inhiben reacciones posteriores, y sistemas optimizados permiten a los investigadores capturar pequeñas cantidades de ácidos nucleicos y entregarlos en pequeños volúmenes (menos de 30 μl) para elución, También hemos desarrollado soluciones automatizadas adecuadas para una variedad de reactivos y rendimientos", afirmó Vincent.
Estos kits proporcionan una solución completa para la elución de ácidos nucleicos en volúmenes extremadamente pequeños y al mismo tiempo evitan residuos de inhibidor en el eluato. Después de la purificación con estos kits, los ácidos nucleicos se pueden utilizar para análisis posteriores, como PCR, secuenciación Sanger, secuenciación de próxima generación y chips.