¿Cuáles son las técnicas comúnmente utilizadas para los exámenes inmunológicos?
1. Tecnología de inmunofluorescencia
La tecnología de inmunofluorescencia utiliza anticuerpos (o antígenos) marcados con fluoresceína para detectar las moléculas correspondientes en tejidos, células o suero. (o método de anticuerpos). Los anticuerpos fluorescentes se utilizan ampliamente en la detección por inmunofluorescencia y en la citometría de flujo debido a su seguridad y sensibilidad. Según los diferentes métodos de marcaje con fluoresceína, se pueden dividir en anticuerpos fluorescentes directos y anticuerpos fluorescentes indirectos. El primer anticuerpo del anticuerpo fluorescente intermarcado no está conectado directamente a la fluoresceína. En cambio, el primer anticuerpo se une a la proteína y luego el segundo anticuerpo con fluoresceína se une al primer anticuerpo. Mediante la unión de anticuerpos secundarios, la señal se puede amplificar, por lo que la sensibilidad de la detección se puede mejorar hasta cierto punto, pero el alto fondo también reduce la especificidad de la detección. En los últimos años, con el avance continuo de la fluoresceína y la tecnología de detección de fluorescencia, la sensibilidad de la detección de fluorescencia se ha acercado al nivel de la detección de isótopos y los anticuerpos fluorescentes marcados directamente han reemplazado gradualmente a los anticuerpos marcados indirectamente. Estos anticuerpos marcados con fluoresceína se unen directamente al antígeno, lo que mejora en gran medida la especificidad de la prueba y hace que los resultados sean más precisos y confiables. Con el desarrollo de la tecnología de detección de fluorescencia, la tecnología de inmunofluorescencia se ha utilizado ampliamente en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, como el examen de anticuerpos IgM en enfermedades infecciosas bacterianas, virales y espiroquetas como marcador de exposición reciente a antígenos. Identificación de subtipos de linfocitos mediante anticuerpos monoclonales fluorescentes marcados directamente. Con la citometría de flujo, se pueden utilizar diferentes anticuerpos fluorescentes para teñir la misma célula con diferentes antígenos en la superficie celular.
2. Radioinmunoensayo
El radioinmunoensayo es actualmente la tecnología de detección más sensible. El antígeno (o anticuerpo) se marca con un isótopo radiactivo y luego se combina con el anticuerpo (o antígeno) correspondiente para determinar el resultado de la detección radiactiva del conjugado antígeno-anticuerpo. Los isótopos radiactivos tienen una sensibilidad de nivel pg y se pueden detectar cuantitativamente trazas de sustancias mediante irradiaciones repetidas. Sin embargo, el daño de los isótopos radiactivos al cuerpo humano también limita el uso de este método.
3. Enzimoinmunoensayo (ELISA)
El enzimoinmunoensayo es actualmente el método de inmunoensayo más utilizado. Este método combina la especificidad de la enzima, la reacción antígeno-anticuerpo y el papel del sustrato catalizado por enzima. El resultado de la detección se juzga en función del cambio de color después de que la enzima actúa sobre el sustrato, y su sensibilidad puede alcanzar el nivel ng. . Las enzimas comúnmente utilizadas para el etiquetado incluyen la peroxidasa de rábano picante (HRP) y la fosfatasa alcalina (AP). El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) se utiliza ampliamente en la detección de enfermedades porque no requiere equipo especial y es fácil de detectar. Los métodos comúnmente utilizados incluyen el método indirecto, el método sándwich y BAS-ELISA. El método indirecto consiste en colocar primero la proteína que se va a analizar en una placa de pocillos, luego agregar el anticuerpo primario, el anticuerpo secundario marcado con enzima y el sustrato en secuencia, y utilizar un instrumento (como un lector de microplacas) para detectar cuantitativamente el antígeno. Este método es simple de operar, pero tiene poca especificidad debido al alto nivel de fondo. Ha sido sustituido paulatinamente por el método sándwich. El método sándwich utiliza dos anticuerpos primarios para capturar e inmovilizar el antígeno objetivo, lo que mejora en gran medida la especificidad de la reacción al tiempo que garantiza la sensibilidad. En los últimos años, las tecnologías de detección cuantitativa de antígenos también han seguido innovando. En los últimos años, se han desarrollado kits de detección de múltiples antígenos basados en ELISA tipo sándwich, que pueden detectar simultáneamente el contenido de múltiples antígenos en trazas de muestras líquidas. La aplicación de esta tecnología acorta enormemente el tiempo de diagnóstico y mejora la confiabilidad y puntualidad del diagnóstico.
4. Tecnología de oro inmunocoloidal
Después de más de 30 años de desarrollo, la tecnología del oro coloidal se ha vuelto cada vez más madura. Este método utiliza partículas de oro coloidal para marcar el anticuerpo secundario y, finalmente, utiliza la reacción específica del antígeno y el anticuerpo para adsorber el anticuerpo secundario marcado con oro coloidal en la membrana del filtro. Este método es simple, rápido y puede usarse ampliamente en el cribado clínico.