Red de conocimiento del abogados - Respuesta a la Ley de patrimonio - ¿Cuáles son los requisitos para la purificación de ácidos nucleicos? Para muchas aplicaciones de biología molecular y genómica, desde la clonación y la PCR hasta la secuenciación del genoma y el análisis de microarrays, la purificación del ADN es el único método. Sin embargo, elegir el mejor kit de depuración no es fácil. Por ejemplo, cuando se purifica ADN genómico, se necesita un kit que pueda manejar ácidos nucleicos suavemente sin aislar el ADN plasmídico. Además, la tecnología de secuenciación de próxima generación impone requisitos muy elevados a las muestras y también necesitamos algunos productos especiales para purificar el ADN. Aquí presentamos algunas opciones nuevas. ¿Método de precipitación de sal epicentro maestro puro (subsidiaria de Illumina)? CompleteDNAPurificationKit utiliza un método patentado de precipitación de sal. Esta serie de kits cubre una variedad de tipos de muestras, que incluyen sangre, tejido fijo, plantas, levaduras, insectos, etc. , puede generar altos rendimientos de ácidos nucleicos con poca pérdida en solo 30 minutos. Según Cristine Kinross, gerente senior de productos de Epicenter, al utilizar estos kits, los usuarios no necesitan realizar una purificación adicional antes de preparar muestras para secuenciación u otras aplicaciones de biología molecular. Eliminan proteínas y otros desechos celulares sin introducir compuestos tóxicos que deban eliminarse, evitando así lavados repetidos y aumentando el rendimiento de ácidos nucleicos. "La pureza de los ácidos nucleicos recuperados por MasterPure es extremadamente alta, lo que permite que las muestras vayan directamente a la preparación de la biblioteca de secuenciación", dijo Kinross. Por supuesto, también es adecuado para otras aplicaciones, incluidas microarrays, qPCR y clonación. Además, este kit también se puede utilizar para la purificación de ARN. Después de obtener el ácido nucleico total, se puede obtener ARN total mediante tratamiento con ADNasa. Varios kits Promega ofrece una variedad de kits de purificación de ácidos nucleicos que utilizan varias estrategias diferentes. ¿Como un mago? El kit de purificación de ADN genómico se basa en el método de precipitación clásico y puede extraer de manera flexible y eficiente ADN genómico de sangre completa, células de cultivo de tejidos, tejidos animales y vegetales, levaduras y bacterias. ¿Qué pasa con ReliaPrep? Esta serie de kits utiliza un método de extracción en columna, que es sencillo y rápido. Además, Promega también ofrece kits de purificación basados ​​en perlas magnéticas. Eric Vincent, gerente global de productos de Promega Genomics, dijo: "Aunque la composición exacta de la solución variará, el proceso básico de lisis, unión, lavado y elución es aplicable a diferentes métodos de unión (como gel de sílice o celulosa), diferentes formatos de purificación (columna de purificación o perlas magnéticas), así como operaciones de purificación manuales y automatizadas "Para algunos tipos de muestras muy importantes (como las muestras FFPE), se requieren algunas operaciones o manipulación especiales. "Desarrollamos tampones de unión/lavado únicos que eliminan eficazmente sustancias que inhiben las reacciones posteriores, mientras que los sistemas optimizados permiten a los investigadores capturar pequeñas cantidades de ácidos nucleicos y eluirlos en pequeños volúmenes (menos de 30 μl). También desarrollamos soluciones automatizadas para un variedad de reactivos y rendimientos”, dijo Vincent. Estos kits proporcionan una solución completa para la elución de ácidos nucleicos en volúmenes muy pequeños y al mismo tiempo evitan residuos de inhibidor en el eluato. Después de la purificación con estos kits, los ácidos nucleicos se pueden utilizar para análisis posteriores, como PCR, secuenciación de Sanger, secuenciación de próxima generación y microarrays. El clásico kit de purificación de ácidos nucleicos con membrana de sílice de QIAGEN se basa en la combinación de ADN y membrana de sílice en la columna de purificación. Los inhibidores se eliminan por lavado y posteriormente el ADN intacto se eluye de la columna con alto rendimiento y pureza, lo que da como resultado bibliotecas de secuenciación de próxima generación de mayor calidad. Marco Lidori, gerente global de productos para la preparación de muestras en QIAGEN, cree que el alto rendimiento se vuelve particularmente importante cuando se trata de muestras extremadamente pequeñas o muestras difíciles como FFPE. Puede producirse una desaminación aleatoria de citosina en el ADN generado a partir de muestras de FFPE, lo que puede dar lugar a polimorfismos de un solo nucleótido (SNP) artificiales. Sin embargo, GeneReadDNAFFPEKit de QIAGEN puede eliminar las citosinas desaminadas, lo que evita resultados erróneos en experimentos de NGS. Este producto aún no se ha lanzado oficialmente. Si está interesado en probarlo, complete la información. "La mayoría de nuestros kits han sido validados en aplicaciones NGS, que van desde la secuenciación del genoma completo del ADN tumoral circulante hasta el microbioma", dijo Polidori. Estos kits permiten a los usuarios obtener ADN de alta calidad a partir de una variedad de muestras, evitar la ilusión CT de las muestras FFPE y obtener ADN de alto peso molecular en poco tiempo. MagAttractHMWDNAkit puede purificar ADN de 100 a 200 kb mediante una simple operación con perlas magnéticas. Todo el proceso de purificación elimina suavemente contaminantes e inhibidores con un rendimiento y una pureza extremadamente altos. ¿GenElute de la empresa de sal caotrópica Sigma-Aldrich? El kit de purificación genómica de mamíferos es un producto a base de reactivos de sales caotrópicas. Las muestras se lisan en soluciones que contienen sales caotrópicas para garantizar la desnaturalización completa de las macromoléculas. Agregue etanol para unir el ADN a la membrana de sílice. Los contaminantes se eliminan por lavado y el ADN se eluye en tampón Tris. Con membranas de sílice seleccionadas específicamente para el aislamiento de ADN genómico, el kit permite a los usuarios purificar ADN de alta calidad a partir de una variedad de muestras, incluidas células cultivadas, tejidos (incluida la cola de rata), sangre entera fresca o leucocitos. Según los informes, este kit combina las ventajas de la unión de membranas de sílice y la microcentrifugación, evitando resinas costosas, precipitación de etanol y sustancias orgánicas nocivas como el fenol y el cloroformo.