¿Cuál es el principio del kit de expresión de proteínas libres de células?

El kit de expresión de proteínas sin células es un kit para la síntesis de proteínas in vitro, que logra la síntesis de proteínas proporcionando los componentes intracelulares necesarios y las condiciones de reacción adecuadas. Su principio de funcionamiento se puede describir brevemente de la siguiente manera:

Selección de ADN de plantilla: inserte la secuencia de ADN del gen objetivo que se expresará en un vector específico (como un plásmido) y seleccione los promotores y elementos reguladores apropiados. para garantizar que funcione en un entorno libre de células. Transcripción y traducción eficientes.

Extracción y lisis celular: Las células del sistema de expresión se extraen y lisan para liberar los componentes básicos de las células, como ácidos nucleicos, aminoácidos, enzimas, etc.

Sistema de suministro de energía: Moléculas energéticas como el ATP y el GTP se suelen utilizar para proporcionar energía para las reacciones necesarias para la síntesis de proteínas.

Sistema de transcripción y traducción: Añade sistemas de transcripción y traducción adecuados en un entorno libre de células, incluyendo ARN polimerasa, NTP, aminoácidos, ARNt, etc. Permite reacciones de transcripción y traducción.

Cofactores: Añadir cofactores adecuados, como enzimas, iones, etc., para favorecer la reacción de las proteínas y el correcto plegamiento.

Ajuste de las condiciones de reacción: Ajustar la temperatura de reacción, el valor de pH, la concentración de iones y otras condiciones para mejorar la eficiencia y estabilidad de la síntesis de proteínas.

A través de los pasos anteriores, el kit de expresión de proteínas libres de células de la presente invención puede lograr la síntesis de proteínas in vitro. Esta tecnología se utiliza ampliamente en la investigación biológica básica, la ingeniería de proteínas, la detección de fármacos y otros campos.