¿Qué hacer si se sintetiza una secuencia utilizando dos pares de cebadores?

1. Determinar el área de diseño del cebador: Primero, es necesario determinar el área de diseño de la secuencia que se necesita sintetizar con dos pares de cebadores. Esta área generalmente contiene el fragmento de ADN que se necesita. ser amplificado.

2. Diseño de cebadores: según el área de diseño, utilice un software de diseño de cebadores en línea como Primer3 para diseñar dos pares de cebadores específicos. Estos cebadores deben cumplir los siguientes requisitos: 18-24 nucleótidos de longitud. El contenido de GC está entre 40 y 60, el valor de Tm está entre 55 y 65 grados Celsius, alta especificidad, suficiente emparejamiento de bases, etc.

3. Compra de cebadores: envíe la secuencia de cebadores a una empresa de cebadores sintéticos para su compra. Por lo general, estas empresas pueden proporcionar servicios de síntesis y purificación de secuencias de cebadores y también pueden proporcionar otros reactivos experimentales relacionados.

4. Reacción de mezcla: Mezcle dos pares de cebadores y ADN molde, agregue una cantidad adecuada de enzima y tampón y realice la amplificación por PCR. Una vez completada la reacción, el producto se puede analizar y probar mediante electroforesis en gel y otros métodos.