¿Qué indican las tres bandas en la electroforesis del ADN plasmídico?
El plásmido de tres bandas de la electroforesis de ADN plasmídico es una pequeña molécula de ADN circular en las células y es un portador comúnmente utilizado para la recombinación del ADN. Como unidad de replicación con su propio origen de replicación, independiente del cromosoma principal de la célula, el ADN plasmídico transporta parte de la información genética, lo que permite a la célula huésped mostrar los rasgos correspondientes después de la expresión genética.
En la recombinación del ADN, los plásmidos o vectores de plásmidos modificados se pueden conectar a genes extraños para formar recombinantes. La extracción de ADN plasmídico de las células huésped es la habilidad experimental más básica en la tecnología de ADN recombinante. Información ampliada
Aislar ADN plasmídico y cultivar bacterias para amplificar el plásmido. Recoger y lisar bacterias. Aislamiento y purificación de ADN plasmídico La lisis alcalina es el método de extracción más utilizado. Su ventaja es que tiene un alto rendimiento y es adecuado para la mayoría de cepas y bacterias. El producto obtenido puede satisfacer la mayoría de las operaciones de recombinación de ADN después de la purificación. Este método utiliza una solución alcalina con un pH tan alto como Ph12,6 para desnaturalizar el ADN.
Debido a las diferentes estructuras topológicas del plásmido y del cromosoma principal, aunque las dos hebras del primero se separan durante la desnaturalización, siguen enredadas y no separadas mientras que el segundo queda completamente desnaturalizado e incluso roto; . Por lo tanto, cuando se agrega la solución neutralizante, el valor del pH de la solución vuelve a un nivel bajo, casi neutro. En este momento, las dos pequeñas moléculas monocatenarias del plásmido pueden renaturalizarse y restaurar rápidamente la estructura bicatenaria, pero. El ADN del cromosoma principal no puede renaturalizarse.
Durante la centrifugación se precipitan la mayoría de los cromosomas principales junto con restos celulares, impurezas, etc., mientras que el ADN plasmídico soluble permanece en el sobrenadante. Durante el proceso de extracción del plásmido, la cadena de ADN del plásmido puede romperse debido a fuerzas mecánicas, pH, reactivos, etc. Por lo tanto, la mayoría de los extractos crudos de plásmidos contienen tres configuraciones de plásmidos: cccDNA: las dos hebras del plásmido no están rotas;