¿Cuáles son los métodos para preservar las cepas bacterianas y los procedimientos operativos para el paso de las cepas bacterianas?

Los métodos para preservar las cepas bacterianas incluyen la criopreservación inclinada, la cubierta de parafina líquida, la preservación con arena, la preservación con papel de filtro, la preservación con tubos de glicerina y la preservación por liofilización. 1. Método de criopreservación inclinada: inocular las bacterias en un medio inclinado sólido adecuado, envolver el tapón de algodón con papel engrasado y luego transferirlo a un refrigerador a 2-8 °C para su almacenamiento. 2. Método de conservación de la cubierta de parafina líquida: utilice parafina líquida para cubrir las bacterias de la pendiente y aislarlas del aire.

1. ¿Cuáles son los métodos de conservación de la cepa?

1. Método de criopreservación inclinada

(1) Inocular la cepa en un medio de cultivo inclinado sólido adecuado. Cuando las bacterias hayan crecido por completo, envuelva el tapón de algodón con papel engrasado y luego transfiéralo a un refrigerador a 2-8°C para su almacenamiento.

(2) Si se trata de moho, actinomicetos y bacterias portadoras de esporas, generalmente se puede almacenar durante aproximadamente 2 a 4 meses y es necesario trasplantarlo una vez. Si se trata de levadura, generalmente se puede almacenar durante aproximadamente 2 meses y es necesario trasplantarla una vez al mes.

2. Método de conservación del recubrimiento de parafina líquida

(1) Poner la parafina líquida en un matraz Erlenmeyer, taparlo con un tapón de algodón, envolverlo con papel kraft y luego guardarlo. a 0.1MPa Esterilizar a 121.3°C durante aproximadamente 30 minutos, luego colocarlo en una incubadora a 40°C para evaporar el vapor de agua.

(2) Utilice un medio de cultivo inclinado adecuado para cultivar las cepas que deben conservarse para obtener esporas o células robustas.

(3) Utilice una pajita esterilizada para aspirar la parafina líquida e inyéctela en la pendiente. La cantidad debe estar aproximadamente 1 cm por encima de la parte superior de la pendiente.

(4) Mantenga el tubo de ensayo en posición vertical y guárdelo a baja temperatura o temperatura ambiente.

(5) Los mohos, actinomicetos y bacterias de esporas se pueden conservar durante más de 2 años, la levadura se puede conservar durante 1 o 2 años, las bacterias generales sin esporas se pueden conservar durante 1 año y los meningococos Se puede conservar durante 3 años a aproximadamente 37 °C.

3. Método de conservación de la arena

(1) Prepare arena de río, agregue ácido clorhídrico diluido al 10, luego caliente y hierva durante unos 30 minutos para eliminar la materia orgánica del interior y luego vierta. el agua ácida Retirar, enjuagar con grifo hasta que el pH sea neutro, luego secar y tamizar (tamiz de malla 40) para eliminar las partículas gruesas.

(2) Preparar la tierra magra de loess o roja sin humus en la capa de no cultivo, remojarla y lavarla varias veces hasta que el pH sea neutro, luego secar, triturar y tamizar (tamiz de malla 100) , elimine las partículas gruesas.

(3) Mezcle arena y tierra en una proporción de 2:1, colóquelo en un tubo de ensayo o ampolla, tápelo con un tapón de algodón y esterilícelo a 1212 °C durante unos 30 minutos. .

(4) Cultive la cepa bacteriana en el medio de cultivo inclinado para obtener células bacterianas robustas, luego inyecte de 3 a 5 ml de agua estéril en el medio de cultivo inclinado y lave las células o esporas para preparar una cepa bacteriana. suspensión.

(5) Utilice una pajita esterilizada para absorber la suspensión bacteriana y luego colóquela uniformemente en el tubo de arena (0,2-0,5 ml/tubo). Si se trata de actinomicetos o moho, puede extraer directamente las esporas y mezclarlas en el tubo de arena.

(6) Aspire el agua del tubo de arena y tierra.

(7) Selle el tubo de arena y tierra con una llama y luego guárdelo en un lugar seco a baja temperatura (4-6°C), o envuélvalo en papel kraft. o papel plástico y guárdelo en un desecador. Durante el almacenamiento, verifique la viabilidad de las bacterias aproximadamente cada 6 meses.

4. Método de conservación del papel de filtro

(1) Prepare tiras de papel de filtro (0,5 × 1,2 cm) y tubos de ampolla (0,6 × 8 cm) y luego coloque cada tubo de ampolla 1- Tome 2 trozos de papel de filtro, tápelos con tapones de algodón y esterilícelos a 0,1 MPa y 121 °C durante unos 30 minutos.

(2) Cultivar la cepa bacteriana en un medio inclinado adecuado para obtener células bacterianas robustas.

(3) Coloque 1-2 ml de leche desnatada esterilizada en una placa de Petri esterilizada, tome unos cuantos anillos de césped bacteriano y mézclelos uniformemente con la leche para hacer una suspensión concentrada, y luego use unas pinzas para retirar. Saque la tira de papel de filtro del tubo y sumérjala en la suspensión bacteriana. Después de que esté llena, vuelva a colocarla en el tubo de la ampolla y conéctela con un tapón de algodón.

(4) Coloque el tubo de la ampolla en un desecador (que contiene pentóxido de fósforo como agente absorbente de agua) y utilice una bomba de vacío para evacuarlo hasta que esté seco.

(5) Introduzca algodón en el tubo, séllelo con llama y luego guárdelo en un ambiente de baja temperatura.

5. Método de conservación del tubo de glicerina

(1) Prepare 80% de glicerol y luego realice la esterilización con vapor a alta presión.

(2) Cultive la cepa bacteriana en un medio inclinado adecuado e inyéctela con agua esterilizada para formar una suspensión bacteriana de alta concentración.

(3) Saque 1 ml de glicerol y mézclelo con el líquido bacteriano de manera uniforme, de modo que la concentración de glicerol sea de aproximadamente 10-30, y luego guárdelo en un ambiente de menos 70 °C.

6. Método de conservación por liofilización

Las células se congelan rápidamente a bajas temperaturas y luego se secan en condiciones de vacío para detener el crecimiento de microorganismos y las actividades enzimáticas. para garantizar que las células estén congeladas No se dañe durante el proceso de sublimación del agua y se deben usar agentes protectores para preparar suspensiones celulares (solutos que protegen a las bacterias durante la congelación y la deshidratación). a través de enlaces de hidrógeno y enlaces iónicos para estabilizar la configuración de los componentes celulares.

2. Procedimientos operativos para el paso de cepas

1. Encender la lámpara de alcohol y quemar el asa de inoculación sobre la llama.

2. Sujete el medio de cultivo inclinado de cepa original (tubo de cepa) y el nuevo medio de cultivo inclinado a inocular (tubo de inoculación) con el pulgar, el índice y el dedo medio de la mano izquierda, y coloque el cuele el tubo en la parte delantera, el tubo de inoculación está en la parte posterior y luego sostenga el tubo de ensayo en un ángulo (45 °) de modo que la pendiente interior del tubo de ensayo quede hacia arriba y las aberturas de los dos tubos de ensayo queden al mismo nivel.

3. Gire los dos tubos de tapones de algodón junto a la llama con la mano derecha, luego sujete el extremo del asa del asa de inoculación con la mano derecha y queme el asa de inoculación verticalmente sobre la llama. El bucle superior debe estar al rojo vivo y cualquier inoculación. Todas las partes que ingresan al tubo de ensayo deben quemarse con una llama.

4. Utilice el dedo meñique y la palma de la mano derecha y el dedo anular y meñique para sacar los dos tubos de tapones de algodón, sujetarlos y luego pasar los tubos de ensayo sobre la llama.

5. Inserte el asa de inoculación en el tubo de cepa bacteriana y póngase en contacto con el medio de crecimiento del césped estéril. Después de que esté frío, saque un poco de césped bacteriano de la pendiente y luego insértelo rápidamente en el. tubo de inoculación, e inocularlo suavemente en la pendiente. Dibujar líneas para la inoculación (dibujar líneas rectas de abajo hacia arriba, luego dibujar curvas de abajo hacia arriba).

6. Una vez finalizada la inoculación, esterilizar la boca del tubo mediante llama y tapar el tapón de algodón.