Métodos de recolección y conservación de tejido cerebral de rata
En la investigación neurobiológica, al realizar observaciones morfológicas del tejido cerebral como microscopía electrónica, histoquímica, hibridación in situ y otros experimentos, para prevenir la autólisis, los tejidos y células mantienen su estado de vida o muerte. El cerebro suele fijarse para determinar su estructura morfológica y preservar las sustancias químicas que se van a detectar. El método más utilizado es la fijación por perfusión transcardial.
El propósito de este experimento es aprender los métodos básicos de fijación y recolección de cerebros de ratas, y sentar una base sólida para futuros experimentos relacionados.
Pasos experimentales y elementos de observación
1. Pasos experimentales
1. Se anestesiaron ratas Wistar, de aproximadamente 250 a 300 g, mediante inyección intraperitoneal de hidrato de cloral al 10% a razón de 4 ml/kg. El paciente se fija en la mesa de operaciones en posición supina.
2． Para abrir el pecho, use las pinzas en su mano izquierda para levantar la piel abdominal. Use las tijeras en su mano derecha para hacer un pequeño corte debajo de la apófisis xifoides. Las pinzas hemostáticas sostienen la apófisis xifoides y levanten las costillas. hacia arriba hasta la mandíbula 2 cm a ambos lados de la apófisis xifoides. Gire el tórax hacia arriba para exponer el corazón.
3． Inserte la aguja de perfusión en el ventrículo izquierdo del corazón desde el ápice cardíaco hasta la aorta ascendente y sujétela con unas pinzas hemostáticas. Cortar la orejuela auricular derecha. Se utilizaron pinzas hemostáticas para sujetar la aorta abdominal.
4. Enjuague con solución salina fisiológica Utilice una jeringa para extraer solución salina fisiológica e inyéctela en el corazón a través de la aguja de perfusión hasta que las dos extremidades anteriores y los pulmones de la rata se vuelvan blancos (aproximadamente 100 ml).
5.4 Fijación de paraformaldehído Conecte la aguja de perfusión al frasco de infusión de paraformaldehído colocado en un lugar alto y continúe la perfusión por gravedad. Al comienzo de la perfusión, las extremidades anteriores de la rata se contrajeron violentamente (ninguna contracción de las extremidades inferiores demostró que la aorta abdominal estaba completamente pinzada. Cuando las extremidades anteriores y el cuello se pusieron rígidos, indicó que el efecto de fijación era bueno y el tejido cerebral perfundido). Era blanca y dura.
6． Para extirpar el cerebro, decapite entre la parte posterior del cráneo y las vértebras cervicales, haga una incisión en el cuero cabelludo a lo largo de la mitad del cráneo para eliminar el tejido blando, use pinzas hemostáticas para retirar gradualmente el cráneo del agujero magno, exponga completamente el cerebro, corte los nervios craneales y extirpar el cerebro completo.
7． Observación o sección anatómica Para una observación macroscópica, se pueden diseccionar estructuras como el hipocampo y el cuerpo estriado. O coloque el cerebro extraído en un tampón de sacarosa al 30% y guárdelo en un refrigerador a 4 °C para seccionarlo congelado en el futuro.
2. Elementos de observación
Observar si el tejido cerebral después de la perfusión está intacto, si queda sangre en los vasos sanguíneos y si el color es blanco y tiene cierta dureza.