¿Qué sustancia química es el TDT?
dtt es ditiotreitol.
Introducción:
El ditiotreitol (DTT) es un agente reductor orgánico de molécula pequeña con fórmula química C4H10O2S2. Es una molécula lineal en estado reducido y se convierte en una estructura de anillo de seis miembros que contiene enlaces disulfuro después de ser oxidada. El ditiotreitol deriva su nombre de treosa, un monosacárido de cuatro carbonos. El isómero de la DTT es el ditioeritritol (DTE), que es el epímero C3 de la DTT.
Usos:
Uno de los usos de la TDT es como agente reductor y desprotector del ADN tiolado. Los átomos de azufre terminales del ADN tiolado tienden a formar dímeros en solución, especialmente en presencia de oxígeno. Esta dimerización reduce en gran medida la eficiencia de ciertos experimentos de reacción de acoplamiento (por ejemplo, inmovilización de ADN en biosensores).
Añadir TDT a la solución de ADN y eliminarla tras un periodo de reacción puede reducir la dimerización del ADN. El DTT también se usa comúnmente para reducir los enlaces disulfuro en las proteínas. Puede utilizarse para prevenir la formación de enlaces disulfuro intramoleculares o intermoleculares entre cisteínas en proteínas.
Sin embargo, el DTT generalmente no puede reducir los enlaces disulfuro incrustados en la estructura de la proteína (no hay disolvente disponible). La reducción de dichos enlaces disulfuro generalmente requiere desnaturalizar la proteína (calentarla a altas temperaturas o agregar un desnaturalizante, como clorhidrato de guanidina 6 M, urea 8 M o SDS al 1%). En cambio, la profundidad de la incrustación se puede juzgar en función de la diferencia en la tasa de reducción del enlace disulfuro en presencia de DTT.
Introducción a las propiedades reductoras del DTT
1. Fuerza reductora
El DTT es un agente reductor muy fuerte, y sus propiedades reductoras se atribuyen en gran medida a su conformacional. Estabilidad de anillos oxidados de seis miembros (que contienen enlaces disulfuro). Cuando el valor del pH es 7, su potencial redox es -0,33 voltios.
2. Estabilidad de reducción
Entre ellos, el estado intermedio formado en la primera reacción es muy inestable porque el segundo grupo tiol del DTT tiende a oxidarse. Los átomos de azufre están conectados. por lo que el estado intermedio se transforma rápidamente en la estructura de oxidación cíclica del DTT, completando así la reducción del enlace disulfuro.
3. Factores que afectan la capacidad reductora
La capacidad reductora del DTT se ve afectada por el valor del pH, y solo actúa como agente reductor cuando el valor del pH es superior a 7. Esto se debe a que sólo el anión tiol desprotonado (-S-) es reactivo, mientras que el tiol (-SH) no lo es; el pKa del grupo tiol suele ser de aproximadamente 8,3.