Investigación sobre el sistema de expresión y purificación de proteínas corporales de aceites vegetales.
He Jia's* *
Instituto de Biotecnología, Academia China de Ciencias Agrícolas, Beijing 100081.
Este artículo presenta las características estructurales de la oleosina en semillas de plantas y la regulación de sus genes codificantes, y explica el progreso de la investigación y las perspectivas del uso del sistema de expresión corporal de aceite vegetal, un nuevo biorreactor vegetal, para producir objetivos. proteínas.
Palabras clave: cuerpo oleoso; proteína del cuerpo oleoso; sistema de expresión; biorreactor vegetal; proteína objetivo
Los sistemas de expresión de genes extraños existentes incluyen principalmente bacterias, hongos filamentosos, levaduras, células de mamíferos y mamas animales. glándulas, insectos (células de insectos, baculovirus de insectos y cuerpos enteros de insectos) y sistemas de expresión de plantas (cuerpos enteros de plantas, vectores virales y cuerpos oleosos). Estos sistemas de expresión de genes exógenos tienen sus propias ventajas y desventajas en términos de cantidad de expresión, aislamiento y purificación de productos de expresión, actividad y costo. A juzgar por el progreso de la investigación en los últimos años, la producción a gran escala de diversas proteínas diana mediante sistemas de expresión de plantas todavía está limitada por muchos factores, entre los cuales el bajo nivel de expresión y los altos costos de extracción y purificación son los principales factores limitantes. El sistema de expresión de cuerpos oleosos de plantas inserta el gen que codifica la proteína diana en el extremo 3' del gen que codifica la proteína oleosina y utiliza el promotor de oleosina para impulsar la expresión específica de la proteína diana y la oleosina en los cuerpos oleosos de plantas transgénicas. Después de obtener semillas de plantas transgénicas, triture las semillas, centrifugue para separar la fase oleosa y la fase acuosa y recupere la parte superior del cuerpo oleoso, lo que puede eliminar la mayoría de los componentes no objetivo de las semillas, reduciendo así significativamente el costo de separación y purificación de proteínas diana en los últimos años. Como nuevo tipo de biorreactor vegetal, proporciona una nueva forma para que las plantas transgénicas produzcan en última instancia proteínas extrañas.
1 Cuerpos oleosos
Los nutrientes almacenados en las semillas de las plantas incluyen principalmente proteínas, grasas y carbohidratos. Los lípidos generalmente existen en forma de triacilgliceroles (etiquetas), a excepción de la jojoba, que almacena ésteres de cera. Las moléculas etiqueta en las semillas no se agregan entre sí, sino que se dispersan en muchas gotitas subcelulares pequeñas y estables llamadas cuerpos oleosos. Como orgánulo más pequeño de los organismos, los cuerpos oleosos tienen su propia estructura y características.
1.1 Tamaño del cuerpo del aceite
Los cuerpos del aceite son esféricos, con un diámetro de 0,5 a 2,5 μm. El tamaño varía según las diferentes especies de plantas y se ve afectado por la nutrición y el medio ambiente. Incluso dentro de la misma semilla, el tamaño de los cuerpos oleosos en diferentes tejidos es diferente. Desde una perspectiva biológica, el tamaño de los cuerpos oleosos está determinado principalmente por dos factores: (1) proporcionar la mayor superficie para las etiquetas catalizadas por lipasa durante la germinación de las semillas (2) consumo mínimo de proteínas y fosfolípidos del cuerpo oleoso, pl). Si el diámetro del cuerpo de aceite es inferior a 0,2 µm, se puede proporcionar una superficie mayor para la catálisis de lipasa, pero se requiere una gran cantidad de pl y oleosina. Por el contrario, si el diámetro del cuerpo oleoso es superior a 2,5 μm, aunque se ahorra la cantidad de pl y oleosina, debido a la pequeña superficie, la lipasa no puede proporcionar la energía necesaria para el crecimiento de las plantas hidrolizando rápidamente los lípidos durante la germinación de las semillas y las plántulas. crecimiento.
1.2 Composición del aceite de motor
La composición de los cuerpos oleosos incluye: (1) 92%-98% de lípidos neutros, principalmente etiquetas, que representan aproximadamente el 95%, y una pequeña cantidad de diacilglicerol. (dag) y ácidos grasos libres; (2) 1%-4% de fosfolípidos (pl): principalmente fosfatidilcolina, que representa aproximadamente 60%-70%, y una pequeña cantidad de fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfolípidos inositol (3) 1%; -4% de proteína del cuerpo oleoso: el 90% de la cual es oleosina y una pequeña cantidad es caleosina y citocromo c reductasa. La lipasa y la acilipasa todavía están presentes en la película de aceite de las semillas maduras de algunas plantas (como el ricino y la soja). No se detectaron oleosinas en el aceite de grano de polen, ni en el aceite cortical de frutos de olivo y aguacate. Dado que los lípidos de estos cuerpos oleosos no se utilizan para el almacenamiento a largo plazo, Murphy y Vance propusieron que las oleosinas pueden ser exclusivas de los cuerpos oleosos de los órganos de almacenamiento, pero ¿n? Sted et al. encontraron que la oleosina está presente en el cuerpo oleoso apical.
1.3 Estructura básica del cuerpo de aceite
Según el modelo de estructura de aceite propuesto por Tzen et al., el interior del cuerpo de aceite es una etiqueta líquida y el exterior está compuesto de una sola molécula de fosfolípido y su proteína mosaico: el aceite. Una membrana de media unidad compuesta de proteínas. La unidad básica de esta membrana de media unidad consta de 13 moléculas pl y 1 molécula de oleosina (Figura 1). Pl representa el 80% de la superficie del aceite y el 20% restante es oleoproteína. Los dos grupos acilo hidrófobos de cada molécula de pl se enfrentan a la matriz de etiqueta hidrófoba interna e interactúan con la molécula de etiqueta. El grupo de cabeza hidrófilo de pl mira hacia el citoplasma. La región hidrofóbica en el medio de la molécula de oleosina forma una estructura de mango de aproximadamente 11 nm, que representa 2/5 de la molécula de oleosina, y se extiende hasta la parte acilo hidrofóbica del pl y la etiqueta en el cuerpo oleoso. Esta parte es una estructura en horquilla compuesta por 68-74 aminoácidos. La parte superior de la estructura en horquilla es un "nudo de prolina" compuesto por tres prolinas y una serina (Figura 1). Los 3/5 restantes de las moléculas de oleosina cubren la superficie del cuerpo oleoso para evitar que las fosfolipasas externas actúen sobre la membrana de media unidad de fosfolípidos. Los resultados del enfoque isoeléctrico muestran que el punto isoeléctrico del cuerpo de aceite es 5,7-6,6, es decir, cuando el valor de ph es neutro, la superficie del cuerpo de aceite está cargada negativamente. Después del almacenamiento prolongado de semillas de plantas, la estructura del cuerpo oleoso permanece estable y no se agrega entre sí. Generalmente se cree que la carga superficial de los cuerpos petrolíferos y la presencia de oleosina son los principales factores que mantienen la estabilidad de la estructura del cuerpo petrolífero.
Los resultados de investigaciones recientes muestran que la superficie de los cuerpos oleosos está incrustada principalmente con oleosina y una pequeña cantidad de otras proteínas, como la caleosina. Por lo tanto, como el orgánulo más pequeño de las plantas, la estructura de los cuerpos oleosos puede ser más compleja que el modelo anterior. La oleosina y la caleosina son dos proteínas con cuerpos oleosos que se han estudiado hasta ahora.
2 Proteína corporal oleosa
2.1 la oelosina y sus características estructurales
La oelaosina se descubrió originalmente en la mostaza. En la actualidad, se ha informado sobre la secuencia genética y la secuencia de aminoácidos de la oleosina de muchas plantas (como sésamo, colza, girasol, zanahoria, maíz, soja, Arabidopsis y algodón). La oleosina es una proteína básica, de pequeño peso molecular, altamente hidrofóbica, con un peso molecular de 15-26 kd, que se expresa principalmente en semillas. En general, se cree que la oelosina es exclusiva de los cuerpos oleosos. Recientemente, se descubrió que existe aproximadamente un 5% de oelosina en el retículo endoplasmático cerca de los cuerpos oleosos y también se encuentra en los cuerpos oleosos de la punta de la raíz. La oelosina se sintetiza en el retículo endoplásmico y por los ribosomas unidos al retículo endoplásmico. Las oleoproteínas están incrustadas en la superficie de los cuerpos petrolíferos y son muy importantes para mantener la estabilidad de los cuerpos petrolíferos. Por un lado, impide estéricamente la polimerización de las moléculas de cuerpos oleosos; por otro lado, se considera que la oleosina es el sitio de unión entre la lipasa y los cuerpos oleosos durante la germinación de las semillas. Los anticuerpos contra la proteína oleosina con mayor contenido en una determinada planta también pueden reconocer proteínas oleosina con pesos moleculares similares en la misma familia, como Brassicaceae 19-20 kd, Asteraceae 20 kd y Leguminosae 24 kd. No sólo eso, las proteínas oleosina entre diferentes sujetos también pueden tener este tipo de interacción.
Las oleosinas de diferentes plantas tienen las mismas características estructurales y todas tienen tres dominios básicos, a saber, una región anfipática que consta de 40-60 aminoácidos en el (1) extremo n (hidrófilo y lipófilo). Esta área está ubicada en el lado del cuerpo oleoso que mira hacia el citoplasma. (2) Una región altamente hidrofóbica en el medio que consta de 68 a 74 aminoácidos. Basándose en la distribución polar de los residuos de aminoácidos en esta región, Tzen y Huang especularon que se trata de una estructura de hoja β transparalela que se extiende hacia la matriz de la etiqueta, con una "prolina" compuesta de 3 prolinas y 1 serina en la parte superior. ". Esta región, especialmente el "nudo de prolina", está altamente conservada entre oleosinas de diferentes fuentes, por lo que puede ser importante para las plantas desde una perspectiva evolutiva. (3) Los 33-40 aminoácidos C-terminales constituyen el dominio helicoidal α. Este dominio es hidrófilo y lipófilo, con su grupo cargado positivamente frente a la parte cargada negativamente de la capa pl (fosfatidilserina, fosfatidilinositol, ácidos grasos libres, etc.) y la parte cargada negativamente frente a la superficie del aceite (Figura 2). Para cada molécula de oleosina, aproximadamente el 20% de los residuos de aminoácidos están incrustados en la capa de PL, el 30% están sumergidos en la etiqueta y el 50% restante están expuestos en la superficie del aceite. El análisis bioquímico de la estructura secundaria de la oleosina respalda el modelo de Cen. Lacey et al. propusieron un nuevo modelo de estructura secundaria de oleosina: es decir, la región hidrofóbica en el medio de oleosina son dos estructuras α-helicoidales independientes conectadas por un "nudo de prolina". Este "nudo de prolina" forma un ángulo de rotación de 180. grados; el terminal n es una estructura de hoja β; el terminal C es una estructura de hélice α hidrófila y lipófila. Los dos modelos anteriores requieren verificación experimental adicional.
2.2 Gen de oleosina y su regulación de expresión
Se descubrió que solo hay una proteína oleosina en las gimnospermas, y los genes de oleosina en las angiospermas a menudo existen en forma de varias familias de genes de oleosina. Los isómeros suelen estar presentes en una planta (Tabla 1). La cantidad de expresión, ubicación y velocidad de cada isómero en las plantas son diferentes. Por ejemplo, el nivel de expresión de oleosina de 18 kd en el maíz es solo del 18 % al 20 % del de 16 kd, y el nivel de expresión de la oleosina de 20 kd en el aceite de colza es de solo el 10 % del de 20 kd.
Características de la regulación de la expresión del gen de la oleosina;
(1) El gen de la oleosina está regulado principalmente por el desarrollo y se expresa durante la maduración de la semilla. Los genes de oleosina son inducidos por estrés hídrico, ácido jasmónico, aba y estabilizadores osmóticos (como el sorbitol). Por ejemplo, se detectó acumulación de ARNm y proteínas entre 0 y 4 horas después de la inducción por ABA de más de 20.000 genes de eosina en colza. Después del tratamiento con estabilizadores osmóticos (como sorbitol) durante 65.438 ± 0 h, se detectó ARNm y acumulación de oleosina a las 3-6 h. La secuencia del motivo Abre (elemento sensible a aba) (t/c acgtggc) existe en la región promotora de los genes de colza y oleosina de Arabidopsis y está inducida específicamente por aba. (2) La expresión del gen de la oleosina es específica de cada tejido y se expresa principalmente en el embrión (escudo e hipocótilo) y en la capa de aleurona de las semillas. De-Oliveira et al. y Robert et al. informaron que se encontró un tipo especial de oleosina en el polen. La proteína oleosina de 20 kd se puede detectar en embriones tanto esféricos como con forma de corazón cultivados a partir de microsporas de colza, y el ARNm correspondiente también se puede detectar en embriones con forma de corazón, lo que indica que la oleosina se expresa en las primeras etapas del desarrollo de la semilla. (3) Hay otras secuencias reguladoras en la región 5' aguas arriba del gen de la oleosina, como catgcang, un elemento regulador de un gen de la proteína de almacenamiento de cereales en la región aguas arriba del gen de la oleosina del arroz. La secuencia aatgcatg presente en el promotor de oleosina de colza es altamente homóloga a la secuencia conservada del motivo ry (catgcatg) que controla la expresión específica de la semilla de genes de leguminosas. La secuencia Caca (taacaca) existe en el promotor del gen de la oleosina de Arabidopsis y es una secuencia común en las proteínas de las semillas de leguminosas.
(4) Aunque el gen de la oleosina se expresa específicamente en tejido, no tiene una secuencia de péptido señal en su extremo 5' y, en consecuencia, no hay una secuencia señal en su extremo N-terminal. Se especula que puede haber algunas secuencias dentro del gen de la oleosina, o que la proteína oleosina puede formar una determinada conformación para posicionarla en la superficie del aceite. Por ejemplo, la eliminación de la parte media de la proteína oleosina afecta seriamente su posición. el cuerpo oleoso, y su N-terminal o la eliminación del C-terminal tiene poco o ningún efecto. Los experimentos en los que tres prolinas del "nudo de prolina" se mutaron en leucina demostraron que el "nudo de prolina" es necesario para la localización de la oleosina en la masa oleosa. La región hidrofóbica en el medio de la oleosina puede ser la señal de localización de la oleosina en el retículo endoplásmico, pero in vitro, la mutación del "nudo de prolina" no afecta la localización de la oleosina en el retículo endoplásmico.
2.3 caleosina
Se aislaron diversas proteínas corporales de aceites vegetales mediante diferentes métodos y se descubrió que, además de la oleosina, también existen algunas otras proteínas. En 1998, Chen et al. utilizaron inmunomarcaje para identificar por primera vez tres proteínas de semillas adicionales: sop1, sop2 y sop3. Después de la determinación de la secuencia de aminoácidos, se descubrió que sop1 es homóloga a una proteína fijadora de calcio en el arroz, por lo que se denominó caleosina. La caleosina está ampliamente presente en las plantas superiores y existen proteínas similares en algas y hongos. Las características de expresión de la caleosina de diferentes fuentes son diferentes. Por ejemplo, la caleosina del arroz se expresa principalmente en las últimas etapas de la embriogénesis y puede expresarse en plántulas y tejidos de crecimiento vegetativo inducidos por aba o estrés hídrico. Al igual que la calcina de arroz, la calcina de sésamo parece expresarse únicamente en las semillas. En condiciones de sequía, Aba puede inducir a Arabidopsis thaliana para que detecte el ARNm de la proteína homóloga a la caleosina. Se sabe que la proteína caleosina en las plantas superiores se divide en tres dominios estructurales: (1) La región hidrófila N-terminal contiene una mano que se une al Ca2+. La proteína de fusión Ef-hand expresada en E. coli puede unirse a ca2+ in vitro. La caleosina1 aislada del aceite de sésamo también puede unirse al ca2+. (2) La región hidrofóbica media, incluida la región de localización de la membrana extracelular N-terminal y la región adyacente rica en prolina. Se sabe que esta estructura sólo existe en algunas plantas superiores como el sésamo, el arroz y la Arabidopsis. (3) Región hidrofílica C-terminal. La región hidrofílica C-terminal de la caleosina en la mayoría de las plantas suele incluir cuatro sitios de fosforilación de quinasa. La estructura y función biológica de la caleosina de diferentes fuentes no están claras, pero se especula que puede estar involucrada en la biosíntesis de lípidos, el transporte intracelular y el metabolismo de los lípidos.
3 Sistema de expresión corporal de aceite vegetal
3.1 Construcción del vector de expresión de la proteína diana de oleosina
Como se mencionó anteriormente, todas las proteínas oleosina tienen tres dominios estructurales, los tres dominios suman aproximadamente 15 kd, pero el peso molecular de la oleosina es muy grande (15-26 kd) y los 1-11 kd adicionales existen en forma de extensiones C-terminal o N-terminal. Las secuencias de nucleótidos de oleosinas de diferentes fuentes difieren mucho entre el extremo N y el extremo C, excepto por la región hidrofóbica media que está altamente conservada. Esto hace que la gente piense que el gen codificante de proteína exógena de pequeño peso molecular se inserta en el extremo 5' o 3' del gen de oleosina para construir un vector de expresión vegetal de "proteína diana de oleosina" impulsado por el promotor de oleosina y transformar la planta receptora. , no afectará la posición de la oleosina en el aceite vegetal. Dado que la oleosina se expresa específicamente en semillas y se incrusta en la superficie de los cuerpos oleosos, en las plantas transgénicas la proteína diana se expresa específicamente en los cuerpos oleosos junto con la oleosina en forma de una proteína de fusión.
3.2 Ventajas del sistema de expresión corporal de aceite vegetal
3.2.1 La proteína de fusión es fácil de separar la oleosina, expresarla como una proteína específica de la semilla e incrustarla en la superficie de cuerpos petrolíferos. La inserción de genes extraños en los extremos N y C de la oleosina para formar una proteína de fusión no cambia las propiedades de la oleosina. Por lo tanto, al triturar semillas de plantas transgénicas → extracción líquida → centrifugación y recuperar la fase oleosa superior, la proteína de fusión se puede separar de otros componentes en las células y se puede eliminar más del 90% de la proteína de la semilla. Cuando la proteína diana insertada en la proteína de fusión es una enzima, la proteína de fusión de oleosina se puede usar directamente como enzima y se puede recuperar después de la reacción enzimática y usar en la siguiente reacción enzimática (como una enzima inmovilizada). Generalmente, aún se mantiene una fuerte actividad enzimática después de un uso repetido 2-3 veces. Si la proteína de fusión está inactiva, la proteína objetivo debe escindirse de la oleosina. Por lo tanto, es necesario introducir un sitio de escisión de proteasa entre la proteína de interés y el gen de oleosina, que a menudo se utiliza como hemolisina. Después de la digestión de la proteína de fusión, intente separar las dos.
3.2.2 La proteína de fusión se puede almacenar de forma estable en las semillas durante mucho tiempo. La actividad de las enzimas hidrolíticas disminuye en las semillas maduras, por lo que la proteína de fusión puede almacenarse de manera estable en las semillas durante mucho tiempo sin degradarse. Según la investigación de van rooijen y moloney, la proteína de fusión oleosina-gus (β-glucuronidasa) se almacenó a 4°C durante más de 65.438±0 años sin degradación.
3.2.3 Las semillas son fáciles de transportar, lo que favorece la evaporación de más del 95% del agua durante la maduración de las semillas en la producción industrial. Son más fáciles de transportar que otras partes de la planta, que. Facilita la producción masiva de la proteína objetivo.
3.2.4 La maquinaria de procesamiento actual es adecuada para la trituración de semillas y la separación de aceite. Por ejemplo, los molinos de agua se utilizan para el procesamiento de granos, mientras que los equipos para separar productos lácteos en la industria láctea se pueden usar para centrifugar y separar. Aceite después de la extracción líquida.
3.2.5 Incrementar el valor añadido de los productos agrícolas. El aceite después de separar la proteína objetivo todavía se puede utilizar como aceite comestible o aceite industrial, y la proteína objetivo puede aumentar considerablemente el valor añadido de los productos agrícolas.
3.3 Utilizar aceite vegetal para expresar proteínas extrañas.
En 1991, Lee et al. informaron por primera vez de la transferencia del gen de la oleosina del maíz a la semilla de colza. El ARNm de oleosina de maíz solo existe en semillas maduras de plantas transgénicas. El nivel de expresión es 65438 ± 0% de la proteína total de la semilla y el 90% del producto de expresión se encuentra en el cuerpo oleoso. La transcripción, traducción y localización correctas del gen de la oleosina del maíz monocotiledónea en cuerpos oleosos de colza transgénicos indican que hay suficiente información en el gen de la oleosina de las monocotiledóneas para funcionar en las dicotiledóneas. Holbrook et al. bombardearon embriones de colza con una pistola genética en 1996 y encontraron en pruebas de expresión a corto plazo que la proteína de fusión oleosina-gus estaba correctamente posicionada en el cuerpo oleoso, lo que verificó aún más las conclusiones experimentales de Lee et al. Moloney insertó el gen gus en el aceite de Arabidopsis. Se construyó el extremo 3' del gen de la oleosina y se construyó un vector de expresión vegetal impulsado por el promotor de la oleosina para transformar la colza mediante un método mediado por Agrobacterium. En las plantas transgénicas, el 80% de la actividad gus se localiza en cuerpos oleosos. El experimento también encontró que la propia proteína de fusión oleosina-gus tiene actividad β-glucuronidasa y no es necesario separar gus de la oleosina. Dado que la proteína de fusión se combina con el cuerpo oleoso, se puede utilizar como enzima inmovilizada varias veces. En 1995, parmenter et al. construyeron un vector de expresión para la proteína de fusión oleosina-hirudina impulsado por el promotor de oleosina de Arabidopsis y transformaron semilla de colza. Después de la detección por inmunofluorescencia, la proteína de fusión se ubicó en la superficie de los cuerpos oleosos y su expresión representó el 65,438 ± 0% de la proteína total de la semilla. Separe la hirudina de la oleosina proteasa para obtener hirudina biológicamente activa. Se descubrió que aunque la proteína de fusión oleosina-gus tiene actividad biológica, la proteína de fusión oleosina-hirudina no tiene la actividad antitrombina específica de la hirudina y debe escindirse de la proteína de fusión con una enzima. En 1997, Liu et al. expresaron con éxito la xilanasa fúngica del rumen en colza transgénica utilizando un sistema de expresión corporal de aceite vegetal.
3.4 Selección de cultivos receptores y proteínas diana
Los cultivos receptores deben ser cultivos con alto contenido de aceite y fáciles de transformar genéticamente. Se deben tener en cuenta las siguientes consideraciones al seleccionar la proteína objetivo: (1) El peso molecular no debe ser demasiado grande para evitar afectar el posicionamiento correcto de la proteína de fusión en la superficie del aceite. En la actualidad, la proteína diana más grande expresada por cuerpos oleosos es gus de 67 kd; (2) la proteína diana debe ser hidrófila, especialmente cuando la proteína diana necesita escindirse de la proteína de fusión (3) la función es clara y la secuencia genética; es conocido; (4) Es caro, tiene buen valor comercial y puede aumentar significativamente el valor agregado de los productos agrícolas.
Con base en las consideraciones anteriores, este laboratorio seleccionó la colza y el algodón como receptores. Para estudiar la aplicabilidad del sistema de expresión corporal de aceite vegetal, seleccionamos la calcitonina, cuyo extremo C requiere amidación para ser biológicamente activa, como proteína objetivo. Actualmente se ha obtenido la cuarta generación de líneas de algodón transgénico y plantas de colza transgénicas. La detección por PCR de colza transgénica demostró que el gen de la calcitonina se ha integrado en el genoma de la colza. Mediante la detección por PCR en el sur y el oeste, se demostró que el gen objetivo se integró en el algodón y se expresó en aceite. Se están realizando pruebas de la expresión y la actividad biológica de proteínas diana en plantas transgénicas. "Un nuevo análogo de la calcitonina de salmón y un método para producir proteínas extrañas utilizando un sistema de expresión corporal de aceite vegetal" han solicitado una patente nacional (como se informa en un artículo separado).
4 Perspectivas y Problemas
Expresión exitosa de proteínas extrañas como gus, hirudina, xilanasa, calcitonina, etc. El uso del sistema de expresión de cuerpos oleosos, especialmente el uso de tecnología de enzimas inmovilizadas, sin duda permite a las personas ver sus perspectivas de aplicación en la producción industrial de proteínas objetivo. Sin embargo, como nuevo tipo de biorreactor vegetal, todavía hay muchas cuestiones que requieren más investigación y discusión, entre ellas: (1) Cómo aumentar aún más la expresión de proteínas y reducir el costo de separación y purificación de las proteínas objetivo. Este problema se vuelve más prominente cuando la proteína de fusión de oleosina no tiene actividad biológica. El costo de la digestión, separación y purificación de la proteasa objetivo es alto, lo que afectará seriamente la aplicación práctica de este sistema. (2) Se sabe que algunas proteínas sólo se vuelven biológicamente activas después de la glicosilación y la amidación. Si la proteína objetivo se puede glicosilar y amidar en el sistema de expresión del cuerpo oleoso y el grado de glicosilación y amidación requiere más investigación experimental. La limitación del sistema de expresión de cuerpos oleosos es que tiene ciertos requisitos sobre el peso molecular, la hidrofilicidad y la hidrofobicidad de la proteína diana. Ningún sistema de expresión es perfecto. Cómo aprovechar al máximo las ventajas de los diferentes sistemas de expresión para expresar proteínas diana apropiadas y beneficiar a la humanidad es un tema que requiere más investigación en el futuro.
Extraído de: Biotecnología Agrícola 2003, 11(5):531-537.