¿Cuáles son los métodos de investigación de la biología molecular?
Biología molecular: Disciplina que estudia las bases materiales de los fenómenos de la vida a nivel molecular. Estudiar las propiedades y cambios físicos y químicos de los componentes celulares y la relación entre estas propiedades y cambios y los fenómenos de la vida, como la transmisión de información genética, estructura genética, replicación, transcripción, traducción, regulación de la expresión y funciones fisiológicas de los productos de expresión, así como así como transducción de señales celulares, etc.
La tecnología más básica en biología molecular es la expresión y purificación de proteínas. Primero, la secuencia de ADN que codifica la proteína de interés se clona (usando tecnología de PCR y enzimas de restricción) en un plásmido que sirve como vector de expresión. Luego, el plásmido construido se introduce en la célula huésped. La secuencia codificante se expresa mediante el sistema de expresión de la célula huésped impulsado por elementos promotores especiales en el plásmido. Los plásmidos a menudo también llevan etiquetas de resistencia a los antibióticos para facilitar la detección de plásmidos.
Los plásmidos se pueden insertar en células bacterianas o animales. La introducción de ADN exógeno en bacterias se denomina transformación, que se puede lograr mediante electroporación, microinyección, absorción positiva y fusión; la introducción de ADN exógeno en células eucariotas, como las células animales, se denomina transfección y tecnología de transfección que incluye fosfato cálcico. método, método de liposomas y algunos reactivos de transfección comerciales patentados. El ADN también se puede introducir en las células huésped utilizando virus o bacterias patógenas como vectores; cuando se aplica esta tecnología de transfección viral o patógena a las células, la terminología es "transducir las células".
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica extremadamente versátil para replicar ADN in vitro. En resumen, la tecnología PCR permite copiar el ADN monocatenario millones de veces y también permite modificar la secuencia de ADN copiada de una forma predeterminada. Por ejemplo, la tecnología de PCR se puede utilizar para introducir sitios de enzimas de restricción o para mutar (cambiar) bases de ADN específicas. La tecnología de PCR también se puede utilizar para obtener fragmentos de ADN específicos de bibliotecas de ADNc o, desde otra perspectiva, para determinar si una biblioteca de ADNc contiene fragmentos de ADN específicos.
La electroforesis en gel es la tecnología más importante en biología molecular. El principio básico es que el ADN, el ARN y las proteínas se pueden separar mediante campos eléctricos. En la electroforesis en gel de agarosa, el ADN y el ARN se pueden separar mediante gel de agarosa según su tamaño molecular. De manera similar, las proteínas se pueden separar por peso molecular mediante electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS (SDS-PAGE); además, las proteínas también se pueden separar mediante electroforesis de enfoque isoeléctrico debido a diferencias en las cargas;