Técnicas analíticas comúnmente utilizadas para pruebas de inmunoensayo clínico

1. Tecnología de inmunomarcaje: 2 categorías

1. (1) Técnica inmunohistoquímica: se utiliza para la localización de antígenos y anticuerpos en secciones de tejido u otras muestras (2) Inmunoensayo: se utiliza para la determinación de antígenos o anticuerpos en muestras líquidas

2. (1) Tecnología de inmunofluorescencia (2) Tecnología de inmunoensayo enzimático (3) Tecnología de radioinmunoensayo (4) Tecnología Gold Standard (5) Tecnología de quimioluminiscencia

¿Tecnología de inmunoensayo enzimático? Tecnología de inmunoensayo enzimático en fase sólida - Enzimoinmunoensayo (ELISA)

Tipos de métodos ELISA y pasos operativos

Método sándwich de doble anticuerpo: el más método comúnmente utilizado para detectar antígenos

Principio (pasos de operación): (1) Los anticuerpos específicos recubren el portador para formar anticuerpos en fase sólida (2) Lave los anticuerpos no unidos y las impurezas (3) Agregue la muestra. que se probará para que el antígeno correspondiente y el anticuerpo en fase sólida se combinen específicamente para formar un complejo (4) Lave nuevamente para eliminar las sustancias no unidas (5) Agregue el anticuerpo marcado con enzima para combinar con el anticuerpo en fase sólida. El antígeno de la fase se une específicamente. (6) Después de un lavado suficiente, se elimina el anticuerpo marcado con enzima libre no unido (7) Se agrega el sustrato de la enzima correspondiente y la enzima inmovilizada cataliza el sustrato en un producto coloreado. reacción de color El grado de

está relacionado con la cantidad de antígeno en la fase sólida

Ámbito de aplicación: el método más común para detectar antígenos. Los antígenos detectados por este método deben. tiene al menos 2 sitios de unión, por lo que no se puede utilizar para determinar sustancias hapteno.

2. Método de competición: (se puede utilizar para medir antígeno o anticuerpo)

Principio (pasos de operación): Tome la medición del antígeno como ejemplo (1) Cubra el portador con el anticuerpo específico, de modo que forme un anticuerpo en fase sólida, (2) elimine las impurezas y agregue la muestra a analizar y el antígeno marcado con enzima al pocillo a analizar al mismo tiempo para reaccionar con la fase sólida anticuerpo. Si la muestra a analizar contiene un antígeno, competirá con el antígeno marcado con enzima para unirse al anticuerpo en fase sólida. Cuanto mayor sea la cantidad de antígeno en la muestra a analizar, menor será la cantidad de antígeno marcado con enzima unido (3) Después de lavar para eliminar la etiqueta de enzima libre, agregue sustrato para el desarrollo del color (4) El resultado es un pocillo de control que no contiene el antígeno probado y la enzima unida tiene la mayor cantidad de antígenos marcados y el color más intenso. La diferencia en la profundidad del color entre el pocillo de control y el pocillo de prueba representa la cantidad de antígeno en la muestra analizada. Cuanto más claro sea el pocillo a analizar, mayor será la cantidad de antígeno en la muestra.

3. Método indirecto: (puede detectar varios anticuerpos correspondientes)

Principio (pasos de operación): (1) Recubrir el antígeno específico con el portador para formar un antígeno en fase sólida; (2) Lavar las sustancias no unidas y agregar la muestra a analizar de modo que el anticuerpo específico a analizar se combine con el antígeno en fase sólida para formar un complejo antígeno-antígeno en fase sólida. (4) Después de un lavado adicional, solo el sólido; la fase permanece Retire el anticuerpo específico (5) Agregue antiglobulina humana marcada con enzima (antianticuerpo marcado con enzima) para unirse al anticuerpo en el complejo de fase sólida, marcando así indirectamente el anticuerpo que se va a probar con la enzima (; 6) Lavar para eliminar el exceso de enzima. Etiquete el anticuerpo, y la cantidad de enzima unida a fase sólida representa la cantidad de anticuerpo que se va a probar. (7) Finalmente, agregue el sustrato para desarrollar el color, y la profundidad del color puede representar la cantidad; del anticuerpo a probar.

Método de inmunofluorescencia---detección de anticuerpos antinucleares

2. Reacción de precipitación

Reacción que se produce cuando un antígeno soluble se une específicamente al anticuerpo correspondiente. La reacción se divide en dos etapas: (1) unión específica de antígeno y anticuerpo (2) formación de complejos inmunes visibles;

3. Reacción de aglutinación

Después de que los antígenos particulados, como bacterias y glóbulos rojos, se combinan con los anticuerpos correspondientes, la aglutinación es visible a simple vista.

La reacción de aglutinación se produce en dos etapas: (1) unión específica del antígeno y el anticuerpo (2) agregación de partículas visibles;