kit de miniextracción de ADN plasmídico biospin

1. Después de agregar etanol absoluto al tampón de lavado, la concentración final es de casi un 70% de solución de etanol en el ADN precipitado, debido a la presencia de demasiadas impurezas salinas, afecta la digestión enzimática y otras. reacciones del ADN. El tampón de lavado se utiliza para eliminar estas impurezas de sal.

2. Utilice etanol absoluto para precipitar el ADN. Este es el método más utilizado para precipitar el ADN en experimentos. La ventaja del etanol es que puede ser miscible con agua en cualquier proporción. El etanol no tiene ninguna reacción química con los ácidos nucleicos y es muy seguro para el ADN, por lo que es un agente precipitante ideal. La solución de ADN es una existencia estable de ADN en estado hidratado. Cuando se agrega etanol, el etanol eliminará las moléculas de agua alrededor del ADN, lo que hará que el ADN pierda agua y se polimerice fácilmente. En experimentos generales, se mezcla 2 veces el volumen de etanol absoluto con ADN, y el contenido final de etanol representa aproximadamente el 67%. Por lo tanto, se puede utilizar etanol al 95% en lugar de etanol anhidro (porque el precio del etanol anhidro es mucho más caro que el del etanol al 95%). Sin embargo, agregar etanol al 95% aumenta el volumen total y el ADN se disuelve hasta cierto punto en la solución, por lo que la pérdida de ADN también aumenta, especialmente cuando se utilizan múltiples precipitaciones con etanol, el rendimiento se verá afectado. Un enfoque de compromiso es utilizar etanol al 95% en lugar de etanol anhidro al precipitar el ADN por primera vez y utilizar etanol absoluto en el paso de precipitación final. También puede utilizar 0,6 veces el volumen de isopropanol para precipitar selectivamente el ADN. Generalmente se puede dejar a temperatura ambiente durante 15-30 minutos. Si no agrega etanol absoluto, el ácido nucleico no puede precipitar y se desechará con la solución de lavado.

3. Cuando el dodecilsulfato de sodio (dodecilsulfato de sodio) encuentra iones de potasio, se convierte en dodecilsulfato de potasio (PDS). Los iones de potasio reemplazan a los iones de sodio en SDS para formar PDS insoluble y se elimina la alta concentración de sal. Hace que la precipitación sea más completa. Como todos sabemos, al SDS le gusta unirse a las proteínas. En promedio, una molécula de SDS está unida a dos aminoácidos. La gran cantidad de precipitados producidos por el reemplazo de iones de potasio y sodio precipitarán naturalmente la mayoría de las proteínas. es que el ADN genómico de E. coli también está presente precipitado por ***. Este proceso no es difícil de imaginar, porque el ADN genómico es demasiado largo y el PDS precipita fácilmente el ADN largo, aunque el SDS no se une a las moléculas de ADN.

Cabe destacar que se añade ácido acético para neutralizar el NaOH, debido a que las condiciones alcalinas a largo plazo interrumpirán el ADN, por lo que hay que neutralizarlo. Una vez que se rompe el ADN genómico, siempre que el fragmento tenga un tamaño de 50 a 100 kb, la PDS ya no lo precipitará. Por lo tanto, el tiempo de tratamiento con álcali debe ser corto y no se debe permitir una agitación vigorosa; de lo contrario, siempre habrá una gran cantidad de ADN genómico mezclado con el plásmido final.