Compatible con lectores ELISPOT (Compatible con lectores elispot)
Los linfocitos estimulados por el antígeno producen localmente citoquinas, que son capturadas por anticuerpos monoclonales específicos (pre-recubiertos) en la membrana de PVDF en el fondo de la placa ELISPOT. Después de la eliminación de las células, las citocinas capturadas se conjugan con anticuerpos monoclonales marcados con biotina y luego con fosfatasa alcalina o avidina marcada con peroxidasa de rábano picante. Aparecen manchas de color púrpura o marrón rojizo en la membrana de PVDF después de agregar el sustrato, lo que indica que las células han producido citocinas. Los puntos son contados y analizados automáticamente por un lector ELISPOT.
La empresa alemana AID se centra desde hace muchos años en la investigación y el desarrollo de analizadores de inmunospot ligados a enzimas. Desde la década de 1990, la AID ha suministrado un gran número de lectores de ELISA a laboratorios de investigación científica, clínicos y farmacéuticos de todo el mundo. Sus aplicaciones en diversos campos se pueden ver en todas partes y se ha convertido en una marca reconocida por investigadores científicos de todo el mundo.
El analizador de inmunomanchas ligado a enzimas AID se utiliza para recopilar, contar y analizar automáticamente las imágenes de manchas de cada pocillo en la placa ELISPOT. No solo puede obtener automáticamente el número de manchas y proporcionar el valor de la actividad de secreción. de citocinas, pero también los resultados negativos y positivos se obtienen directamente de acuerdo con reglas de interpretación preestablecidas, y los resultados se envían a JPG, EXCEL, TXT, PPT, etc. También se puede conectar al sistema LMS del laboratorio para la gestión y salida de datos, convirtiéndose así en una herramienta de análisis ELISPOT confiable.
Además, el ELISPOT tradicional también tiene limitaciones, al carecer de la detección simultánea de múltiples citoquinas producidas por células T. Para superar este problema, se desarrolló un ensayo de inmunomancha fluorescente (mancha fluorescente) basado en marcadores fluorescentes. Esta nueva tecnología de análisis de inmunotransferencia fluorescente se puede utilizar para detectar linfocitos que expresan una variedad de citocinas a nivel unicelular, como células T que expresan IFN-γ (marcador fluorescente verde) e IL-2 (marcador fluorescente rojo).
Por primera vez, el AIDSPOT Reader alemán ha realizado el análisis simultáneo de ELISPOT tradicional y puntos fluorescentes de inmunospot fluorescentes utilizando un analizador de inmunospot ligado a enzimas: AIDSPOT Reader recoge puntos fluorescentes verdes (etiquetados con FITC) en cada pocillo de la placa ELISPOT) y la imagen de punto fluorescente rojo (IL-2 marcada con Cy3), una cada una, y las dos imágenes se fusionan mediante la tecnología de superposición de imágenes de fluorescencia patentada de FluoroAID para garantizar la precisión del recuento de puntos de tinción.
El analizador de inmunospot ligado a enzimas AID utiliza productos del mundialmente famoso fabricante de reactivos ELISPOT, Swedish Mabtech Company. Puede usarse para humanos, monos, ratones, células de ratón y otras especies, así como en el ámbito veterinario. campo, detectando la respuesta inmune de bovinos, ovinos y células T/B en muestras como caballos y cerdos. Además de las series IFN-γ e interleucina, también existen TNF-α, perforina, granzima B y MIP-1β.
①Humano: apoE, GM-CSF, granzima B, IFN-α (Subt.2, 8, 10, 14, 17), IFN-α (panespecífico), IFN-γ, IL-1β . IL-12/-23(p40), IL-12(p70), 13, 17A, 21, 23, 31, MIP-1β, perforina, TNF-α;
②Mono: IFN-γ, IL-2, IL-17;
③Ratón: GM-CSF, IFN-α, IL-4, 5, 6, IL-12/-23 (p40), IL-13, IL-21 , MIP-1β, perforina, TNF.
④Otros: kit Lyme spot, EBV-Spot, CMV-Spot, Trans Spot;
⑤Para obtener más kits de ELISPOT de células T/B y manchas fluorescentes, consulte.
Alta sensibilidad: tasa de detección de 1 célula positiva entre 200.000-300.000
Intuitivo y fiable: detección a nivel de una sola célula, una célula positiva tiene un punto y el número de puntos representa; secreción celular La cantidad de citocinas y el tamaño de las manchas representan el nivel de citocinas secretadas por las células;
Qualcomm: una placa ELISPOT se puede utilizar para 96 pruebas y los investigadores pueden analizar cientos de muestras cada día. Sólo una pequeña cantidad de células, como 45 ml de sangre, es suficiente para probar las respuestas a 600 antígenos/péptidos diferentes.
Pruebas funcionales de células vivas: las citocinas que se están probando no existen, pero se secretan mediante estimulación externa durante el proceso de prueba;
Aplicable a experimentos clínicos: después de la criopreservación y recuperación de las células. no pierda la función inmune, lo cual es muy importante para los ensayos clínicos.
Las muestras antes y después del procesamiento se pueden analizar en paralelo y los resultados se pueden replicar si el ensayo involucra a varias instituciones clínicas, las muestras de sangre se pueden congelar y transportar a un laboratorio central para su análisis.
ELISPOT no sólo se utiliza como herramienta de investigación científica, sino también para el diagnóstico clínico. Recientemente, la SFDA aprobó la comercialización de la primera plataforma de diagnóstico (T-Spot. TB) basada en el método ELISPOT. Este método de prueba para detectar la infección por tuberculosis detecta respuestas inmunitarias de células T específicas midiendo la secreción de IFN-γ estimulada por antígenos específicos de la tuberculosis. Puede reemplazar las pruebas cutáneas tradicionales y mejorar en gran medida la sensibilidad y especificidad, y no se ve afectada por la vacuna BCG. ELISPOT también se puede utilizar para la investigación de la inmunidad antiinfecciosa y el diagnóstico de otras enfermedades infecciosas, como la hepatitis B, la hepatitis C, el virus de Epstein-Barr, el citomegalovirus y la enfermedad de Lyme.
El método ELISPOT es una herramienta estándar reconocida internacionalmente para detectar y evaluar los niveles de inmunidad celular de las vacunas. A nivel internacional, el método IFN-γ ELISPOT se usa ampliamente en la investigación de vacunas contra el VIH para monitorear las respuestas inmunes, y el método ELISPOT se usa en el Plan de Acción Internacional para una Vacuna contra el SIDA para evaluar la función de las células T en una gran cantidad de ensayos para monitorear nuevas vacunas candidatas contra el VIH. . cosas. El método ELISPOT define la eficacia de una vacuna midiendo su capacidad para inducir una fuerte respuesta de las células T. El método ELISPOT se puede utilizar para detectar y determinar los epítopos de antígenos de células T específicos en el desarrollo y diseño de vacunas. Esta información también se puede utilizar para evaluar estrategias y rutas de inmunización apropiadas.
El Instituto de China para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos señaló en las "Directrices técnicas para la investigación preclínica de vacunas preventivas de ADN" y en los "Principios de indicadores técnicos para preparaciones de vacunas vivas preventivas que utilizan virus como portadores" que El método ELISPOT es un método para detectar y evaluar células vacunales. Un método eficaz para la potencia inmune. Como método más sensible para detectar la secreción específica de células T/B, la tecnología ELISPOT es particularmente importante para detectar pequeñas cantidades de células T de memoria específicas de antígeno. Se ha utilizado ampliamente en el desarrollo y evaluación de vacunas preventivas y terapéuticas, como por ejemplo. Vacunas contra el SIDA, vacuna contra la hepatitis B, vacuna contra la influenza y diversas vacunas contra tumores.
ELISPOT se puede utilizar para distinguir diferentes subconjuntos de células T activadas en función de las diferentes citocinas detectadas. Por ejemplo, las células Th1 secretan principalmente IFN-γ, IL-2 y TNF-α, y otras citoquinas como IL-4, IL-5 e IL-13 generalmente son secretadas por las células Th2. Un punto importante en la investigación de las alergias es la medición de las citoquinas Th2 mediante ELISPOT, porque la respuesta Th2 es la principal reacción de la alergia, pero generalmente ocurre con baja frecuencia y requiere un método altamente sensible para una detección exitosa.
Los alergólogos utilizan cada vez más el método ELISPOT en la monitorización de las respuestas inmunitarias de las células T en la inmunoterapia para reacciones alérgicas específicas; en la detección y el diagnóstico in vitro de alergias de contacto mediadas por células. Debido a que factores como la IL-4, la principal citocina de las respuestas de tipo Th2, siempre son difíciles de detectar mediante otros métodos como la citometría de flujo y ELISA, la alergia se estudió utilizando el método ELISPOT altamente sensible. La respuesta inmune específica original es particularmente. importante.
La tecnología ELISPOT también se utiliza ampliamente en el diagnóstico y la investigación de la etiología de enfermedades autoinmunes, como el análisis de la etiología y la predicción de enfermedades de diabetes tipo I, esclerosis múltiple, miastenia gravis y lupus eritematoso sistémico, diagnóstico temprano. Tratamiento guiado y análisis de pronóstico.
Aunque ELISPOT se utiliza principalmente para el análisis de células T y B, también es adecuado para cualquier experimento en el que desee estudiar la secreción de proteínas a nivel unicelular. Este método es particularmente adecuado para experimentos en los que el número de células efectoras es crucial o tiene importancia biológica, como el análisis cuantitativo de monocitos que secretan IL-6 e IL-1β después de la estimulación con LPS de PBMC; además, también es particularmente adecuado para; estudiar la cantidad En la sangre son especialmente escasas las células secretoras, como las células dendríticas plasmocitoides, pero el IFN-α que secretan tras la activación puede detectarse fácilmente mediante ELISPOT.
Por ejemplo
Cribado de fármacos: cribado de compuestos y respuesta inmune a fármacos;
Investigación de inmunidad tumoral: se ha utilizado para analizar y evaluar la inducción de tumores. especificidad en pacientes con tumores. ensayos de vacunas de células T. La detección de niveles específicos de respuesta inmune celular antes y después del tratamiento puede evaluar eficazmente el efecto del tratamiento y proporcionar información de referencia importante para el tratamiento y la medicación.
Investigación sobre inmunidad al trasplante: predicción del rechazo del trasplante.
Desde su lanzamiento, más de 65.438+0.500 laboratorios en todo el mundo han utilizado el analizador de inmunomanchas ligadas a enzimas de AID. El hardware y el software del lector AID ELISPOT cumplen totalmente con la certificación CE de la UE, las especificaciones FDA 21 CFR Parte 11 y los estándares GMP/GLP.
Adquisición y conteo de imágenes de moteado
Placa de lectura completamente automática, recopila automáticamente imágenes de cada pocillo y calcula automáticamente el número de puntos y la información relacionada con los puntos, como el tamaño, el área y la óptica; densidad, etc. La configuración de parámetros incorporada para diferentes factores se puede llamar directamente; la función CountAID ayuda a optimizar los parámetros de lectura y tiene una función de memoria de parámetros inteligente.
Análisis de resultados
Determina directamente los resultados de las pruebas de yin y yang. El módulo de diagnóstico AIDiagnostic es adecuado para interpretar los resultados del experimento ELISPOT para el diagnóstico clínico y genera la imagen moteada y el resultado; informe de cada paciente respectivamente; análisis estadístico de la distribución de manchas en cada pocillo, comparación de respuestas inmunes, comparación cuantitativa de secreción de citoquinas, etc.
Salida de datos y control de calidad
Puede generar imágenes de pocillos individuales, imágenes de pocillos arbitrarios e imágenes de placas completas; múltiples formatos de guardado, Excel, Txt, PPT, etc. Los datos de salida se pueden personalizar para incluir número de punto, SFU, intensidad de densidad óptica, actividad, mapa de distribución de puntos, etc. Incluye módulo de control de calidad, registra automáticamente el historial de operaciones y cumple con las especificaciones GLP.
Análisis ELISPOT de dos colores con Fluorospot: Fluorospot utiliza tecnología patentada de superposición de imágenes de fluorescencia para garantizar la identificación precisa de los puntos de secreción del factor multicolor * * * y evitar la secreción desigual de diferentes citocinas en dos colores marcados con enzimas. Detección de color. Error de juicio. Rueda de filtros de 4 a 8 posiciones, conmutación completamente automática, al menos filtros de fluorescencia FITC y Cy3 estándar, se pueden agregar otras longitudes de onda.
Traducción totalmente automática
ISpot genera imágenes de puntos fluorescentes de varios colores en cada pocillo de la placa por separado, como la detección de IFN-γ marcado con FITC y de IL-2 marcado con Cy3. Secreción, el software superpone automáticamente diferentes imágenes de fluorescencia para identificar con precisión la secreción de las células * * * (IFN-γ&: IL-2). Todo el proceso está totalmente automatizado y no requiere intervención manual.
Rendimiento estable, buena compatibilidad y escalabilidad
La excitación de alta energía garantiza una detección de señal de fluorescencia débil, los filtros de banda estrecha garantizan una detección de señal específica y la expansión multicolor solo requiere filtros.
Progreso tecnológico
El primer analizador de puntos ligado a enzimas comercializado en el mundo, patentado "Método ELISPOT para detectar la actividad de las células sanguíneas" en 1996, la única patente PCT/EP2008/009112 - Ácido de flúor; es un sistema de detección ELISPOT fluorescente multicolor basado en filtros de fluorescencia.
Autoridad editorial académica
Desde el lanzamiento de los productos fluorescentes en 2007 hasta ahora, el 80% de los documentos del SCI sobre la aplicación de ELISPOT fluorescente son publicados por la AID, reconocida como la mejor en la detección de fluorescencia.
Altamente reconocido internacionalmente
Fue desarrollado en estrecha colaboración con el Laboratorio de Inmunología de Oxford de la Universidad de Oxford y es una herramienta dedicada al diagnóstico de tuberculosis con T-Spot. Marca designada por la Iniciativa Internacional de Vacunas contra el SIDA (IAVI); marca exclusiva de los laboratorios de desarrollo de kits ELISPOT de renombre mundial (como el sueco Mabtech).
Comuníquese con nosotros al 13521452266 para solicitar una prueba del analizador de inmunomanchas ligado a enzimas AID.
——Agente de primer nivel de la ayuda alemana a China, Zeping, Beijing