¿Cuál es el método de la velocidad promedio inicial?

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Descripción del problema:

Un método para medir el contenido de sustancias

Análisis:

El mini enema compuesto Yinhuang se compone principalmente de Scutellavia baicalensic Gei y Lonicera japonica Thunb. Tiene las funciones de eliminar el calor, desintoxicar y antiinflamatorio. Sus componentes principales, baicalina (baicalina) y ácido clorogénico (ácido clorogénico), tienen grupos hidroxilo o-difenólicos y se degradarán oxidativamente después de permanecer durante mucho tiempo [1]. En este artículo, utilizamos el contenido de ácido clorogénico y baicalina como indicadores y, basándose en el principio del método de velocidad promedio inicial [2], llevamos a cabo un experimento de destrucción acelerada de la preparación, medimos los cambios en su contenido con alta- cromatografía líquida de rendimiento y estableció una ecuación de regresión lineal para obtener el valor r, el período de validez a temperatura ambiente y la energía de activación.

1 Instrumentos y materiales experimentales

1.1 Instrumentos

Cromatógrafo líquido de alta resolución LC-8A (Shimadzu, Japón), detector ultravioleta visible SPD-6AV, SCL- Controlador de sistema 8A, procesador de datos C-R4A, centrífuga de alta velocidad LG15-W (Fábrica de centrífugas médicas de Beijing), espectrofotómetro UV-visible UV-160A (Shimadzu, Japón), horno eléctrico de secado rápido (Fábrica de instrumentos experimentales de Nanjing).

1.2 Materiales

Microenema compuesto de color amarillo plateado (hecho en casa, número de lote 970201), ácido clorogénico y sustancias de referencia baicalina (Instituto Chino para el Control de Productos Farmacéuticos y Biológicos, número de lote 753 respectivamente) -8701 y 715-8501), metanol (puro de excelente calidad), agua (agua desionizada y destilada) y otros reactivos son de grado analítico.

2 Métodos y resultados

2.1 Determinación del contenido de ácido clorogénico y baicalina mediante cromatografía líquida de alta resolución

2.1.1 Preparación de solución de referencia

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Preparación de solución de sustancia de referencia de ácido clorogénico: Pesar 4,3 mg de sustancia de referencia de ácido clorogénico, disolverlos en acetonitrilo al 20 % y diluir a 25 ml.

Preparación de solución de sustancia de referencia de baicalina: Pesar 9,9 mg de sustancia de referencia de baicalina, disolverla en solución de metanol al 50% y diluir a 25 mL.

2.1.2 Preparación de la muestra de prueba

Tomar 1 mL de la muestra en un matraz aforado de 10 mL, agregar 20% de acetonitrilo para diluir hasta la marca y luego tomar 0,025 mL en En un matraz aforado de 10 ml de medio, agregar acetonitrilo al 20 % para diluir a volumen, centrifugar a alta velocidad (15 000 r/min, 15 min) y reservar.

2.1.3 Determinación de la longitud de onda de detección

Tome la solución de control de ácido clorogénico, use una solución de acetonitrilo al 20% como blanco para el escaneo UV, tome la solución de referencia de baicalina, use metanol al 50%; La solución estaba en blanco y se realizó una exploración UV. El espectro se muestra en la Figura 1. La longitud de onda de absorción máxima λmax del ácido clorogénico es de 326 nm, y la longitud de onda de absorción máxima λmax de la baicalina es de 280 nm.

2.1.4 Condiciones cromatográficas

Condiciones cromatográficas del ácido clorogénico: columna Shim-pack CLC-ODS (15 cm×6,0 mm; temperatura de la columna: temperatura ambiente, longitud de onda de detección: 326); nm; fase móvil: metanol-agua-ácido acético glacial (22:78:1); velocidad de flujo: 1 ml/min; sensibilidad del papel: 0,02 AUFS;

Condiciones cromatográficas de baicalina: columna Shim-pack CLC-ODS (15 cm×6,0 mm), temperatura de la columna: temperatura ambiente; longitud de onda de detección: 280 nm; fase móvil: metanol-agua-ácido fosfórico-trietilo; Amina (60:40:0,2:2 gotas); caudal: 1 ml/min; velocidad del papel: 10 mm/min; sensibilidad: 0,02 AUFS.

Figura 1 Espectro de absorción UV de baicalina y ácido clorogénico

Fig.1 Espectro UV de baicalina y ácido clorogénico

——: Baicalin Baicalin ……:Chlenic; ácido.

Figura 2 Cromatograma de sustancia de referencia de baicalina y ácido clorogénico

Fig.2 Cromatograma de colador de baicalina y ácido clénico

a:Baicalina b:Ácido clénico.

Figura 3 Cromatograma de muestra

Fig.3 Cromatograma de muestra

a: Ácido clénico; b: Ácido clénico.

2.1 .5 Preparación de curva estándar

2.1.5.1 Preparación de curva estándar de ácido clorogénico

Tome el Ponga 0,25 mL, 0,50 mL, 0,75 mL, 1,00 mL y 1,25 mL de ácido clorogénico solución de referencia en un matraz volumétrico de 10 ml, agregar acetonitrilo al 20 % hasta la marca, centrifugar a alta velocidad (15 000 r/min, 15 min) y seguir la cromatografía anterior Inyección condicional, el volumen de inyección es 20 μL, el cromatograma es como se muestra en la Figura 2, con el volumen de inyección como eje x y el área del pico como eje y, dibuje una curva estándar. La ecuación de regresión es y=188 186,046 5x-1 914, r=0,999 9, lo que muestra que la sustancia de referencia del ácido clorogénico tiene una buena relación lineal en el rango de 0,086 μg ~ 0,43 μg.

2.1.5.2 Preparación de la curva estándar de baicalina

Tomar 0,01 ml, 0,03 ml, 0,05 ml, 0,07 ml, 0,09 ml de solución de referencia de baicalina y utilizar metanol al 50 % cada una. se diluyó a 1 ml. En las condiciones cromatográficas anteriores, se inyectaron 15 μL de cada muestra para determinar el área del pico. El cromatograma se muestra en la Figura 2. Dibuje una curva estándar con el volumen de inyección como el eje x y el área del pico. como el eje y. La ecuación de regresión es y=2 413,075 + 2,041 028 × 105x, y el coeficiente de correlación r=0,999 7. Muestra que la sustancia de referencia baicalina tiene una buena relación lineal en el rango de 0,059 μg ~ 0,53 μg.

2.2 Experimento del método de destrucción acelerada con velocidad promedio inicial

2.2.1 Método [2]

Tome 4 microenemas compuestos Yinhuang (cada grupo), colóquelos en un horno de secado rápido eléctrico y realice un experimento de destrucción acelerada a temperatura constante a las siguientes temperaturas y tiempos diferentes (consulte la Tabla 1, sáquelo inmediatamente y enfríelo a temperatura ambiente con agua fría para terminar la reacción). Las muestras de cada grupo se trituraron y mezclaron, y se midieron mediante HPLC los contenidos de ácido clorogénico y baicalina.

2.2.2 Resultados de la medición

El modelo matemático de procesamiento de datos es que tomando la concentración inicial de ácido clorogénico y baicalina como Coj, los resultados se medirán a diferentes temperaturas (Ti) y los tiempos correspondientes (ti) se convirtieron en tasas residuales (Tabla 1), el cromatograma se muestra en la Figura 3; Calcula la velocidad inicial a diferentes temperaturas según la siguiente fórmula [2]

Voj=(Coj-Cij)/ti

donde Coi y Cij son los valores del ácido clorogénico y baicalina respectivamente. Concentración a temperatura ambiente y a diferentes temperaturas experimentales; ti es el tiempo de temperatura constante (h) correspondiente a la temperatura. [j=1 (ácido clorogénico), 2 (baicalina); i=1,2,3,…,m]

Utilice lgvoj para hacer la regresión 1/T y obtenga la ecuación de regresión lineal lgvoj=a. +b /Ti y el coeficiente de correlación lineal r, y luego calcular la energía de activación según la fórmula de Arrhinius lgvoj=〔-E/(2.303×RTi)〕+lgA, donde R es la constante de los gases, R=1.987 cal.grado -1.mol-1 E.

Encuentre lgv298K a temperatura ambiente (298 K) a partir de la ecuación de regresión lineal y encuentre v298K a partir del antilogaritmo.

Calcule el período de almacenamiento a temperatura ambiente a partir de Voj=(Coj-Cij)/ti, es decir, calcule el tiempo t cuando 100%-C%=10% a T=298 K.

Resultados del procesamiento de datos de ácido clorogénico: lgvo1＝19.824 237-6902.652 72 1/T, |r｜＝0.991 8, E＝31.58 696 KCal/mol, V298K＝4.581 137×10-4h-1, =2,49 años.

Resultados del procesamiento de datos de Baicalin: lgvo2＝20.727 948-7129.837 18 1/T, |r｜＝0.985 5, E＝32.626 57 KCal/mol, V298K＝6.343 36×10-4h-1, = 1,80 años.

Tabla 1 Datos de prueba de velocidad de rotura uniforme inicial

Tabla 1 Datos de prueba de velocidad de rotura uniforme inicial

Tiempo termostático

Termostático

tiempo ti

(h) Temperatura

Temperatura

Ti

(K) Contenido de ácido clorogénico Ci1

Contenido de ácido clénico

(%) Contenido de baicalina Ci2

Contenido de baicalina

(%)

1 363 93,93 89,08

2 358 94,61 90,96

3 353 95,03 91,87

4 348 95,30 90,53 < / p>

5 343 96,55 93,35

6 338 97,89 96,32

7 333 99,12 98,26

8 328 99,66 99,28

9 323 99,76 99,75

3 Discusión

La madreselva y la escutelaria son los principales fármacos del microenema de Yinhuang. El ácido clorogénico es uno de los ingredientes activos claros de la madreselva y la Scutellaria baicalensis. Uno de los ingredientes activos relativamente claros, por lo que este artículo utiliza los cambios de contenido de ácido clorogénico y baicalina como indicadores.

Los componentes a medir y las impurezas lograron buenos resultados de separación en las condiciones cromatográficas de este artículo, y la ecuación de regresión obtenida fue satisfactoria. Muestra que es factible utilizar cromatografía líquida de alta resolución para determinar los cambios de contenido de ácido clorogénico y baicalina, los componentes principales del microenema de Yinhuang.

Los datos de energía de activación del ácido clorogénico y la baicalina medidos por el método de velocidad promedio inicial son similares a los 27,4 Kcal/mol y 27,0 Kcal/mol reportados en la literatura [4], lo que indica que el período de validez previsto Se puede utilizar para controlar la calidad de la preparación.