Introducción a la diferencia entre DMEM y medio 1640
Existen muchos medios de cultivo clásicos, entre los que DMEM, RPMI 1640, MEM y DMEM/F12 son los medios de cultivo más utilizados. También se utilizan otros como el medio M199, IMDM, L15, etc. para el cultivo de determinadas células. Sus características y aplicaciones específicas son las siguientes:
Basal Medium Eagle, diseñado por Eagle en 1955, BSS + 12 aminoácidos + glutamina + 8 vitaminas. Simple y fácil de agregar, es adecuado para diversas líneas celulares de paso e investigaciones especiales. Sobre esta base, las variedades mejoradas de medios de cultivo celular incluyen MEM, DMEM, IMDM, etc.
También conocido como Medio Esencial Mínimo, fue modificado a partir del Medio Básico de Eagle (BME) en 1959, eliminando lisina y biotina, y aumentando la concentración de aminoácidos. Es adecuado para que muchas células semilla crezcan en un. monocapa, y existen variedades esterilizables en autoclave. Es el medio más básico con la más amplia gama de pruebas. Sin embargo, debido a su contenido nutricional limitado, no necesariamente puede usarse para cultivar y expresar células específicas para la producción. medio.
DMEM es el medio Eagle modificado de Dulbecco, diseñado originalmente para fibroblastos de ratón. La concentración de aminoácidos de DMEM es el doble que la de MEM, la concentración de vitaminas es 4 veces mayor que la de MEM y la concentración doble de HCO3- y CO2 se utiliza para proporcionar un mejor efecto amortiguador. El contenido de glucosa en la fórmula original era de 1000 mg/L. Posteriormente, para las necesidades de crecimiento de ciertas células, el contenido de glucosa se ajustó a 4500 mg/L. Esto es lo que todo el mundo suele llamar bajo y alto en azúcar.
Bajo en azúcar es adecuado para el cultivo de células dependientes de adherencia, especialmente para el cultivo de células tumorales de rápido crecimiento y mala adhesión. El alto contenido de azúcar es más adecuado para el cultivo de células en suspensión de alta densidad. También es adecuado para el cultivo de clones con mala adhesión pero no quiere que se separe del punto de crecimiento original. También se puede utilizar para el cultivo de células de mieloma en hibridomas. y células transformadas transfectadas con ADN. Por ejemplo, las células CHO expresan y producen la vacuna contra la hepatitis B y las células CHO expresan EPO.
Guilber e Iscove modificaron el medio de Dulbecco para convertirlo en medio de Iscove para cultivar glóbulos rojos y precursores de macrófagos. Este medio de cultivo contiene selenio, aminoácidos y vitaminas adicionales, piruvato de sodio y HEPES. Y se utilizó nitrato de potasio en lugar de nitrato férrico. IMDM también puede promover el crecimiento de linfocitos B de ratón, células B estimuladas por LPS, células hematopoyéticas de la médula ósea, células T y células de linfoma. IMDM es un medio de cultivo muy rico en nutrientes, por lo que puede utilizarse para cultivos de proliferación rápida de células de alta densidad.
Desarrollado por Moore et al. en Roswell Park Memorial Institute en 1967, está diseñado para cultivo de linfocitos y contiene BSS + 21 tipos de aminoácidos + 11 tipos de vitaminas. Ahora también se utiliza para el cultivo de células en suspensión, como mamíferos, células hematopoyéticas especiales, leucocitos normales o malignos, células de hibridoma y otros linfoblastos como K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, etc. , se pueden utilizar como referencia células de linfoma de células T y células epiteliales HCT-15.
Diseñado por Ham en 1963, contiene oligoelementos y puede utilizarse cuando los niveles séricos son bajos, siendo apto para cultivo clonal. F10 es adecuado para células diploides humanas y de hámster, especialmente cultivos de células de líquido amniótico.
Ham's F12 está diseñado para clonar células CHO en bajas concentraciones séricas y actualmente se utiliza ampliamente en el análisis de la tasa de formación de colonias y en el cultivo primario. F12 también se puede mezclar con volúmenes iguales de DMEM para obtener un producto que combine alta concentración y diversos ingredientes. Este medio se ha utilizado en el cultivo de muchos cultivos primarios y líneas celulares más difíciles de cultivar. Debido a que es rico en nutrientes y puede utilizar menos suero, a menudo se utiliza como medio basal para medios sin suero.
En 1950, Morgan et al. diseñaron un medio de cultivo celular con una composición química definida, denominado M-199. Además de BSS, contiene 53 componentes y es un medio de cultivo integral, utilizado principalmente para el cultivo de fibroblastos de embriones de pollo. Este medio de cultivo debe complementarse con suero para apoyar el cultivo a largo plazo. M-199 se puede utilizar para cultivar células de una variedad de especies y puede cultivar células transfectadas. Ahora se utiliza ampliamente en virología y producción de vacunas.
MeCoy fue diseñado para células de sarcoma en 1959, con ingredientes BSS+40. Puede favorecer el crecimiento de una variedad de injertos primarios (como médula ósea, piel, pulmones, bazo, etc.). Además de ser adecuado para el cultivo celular primario general, se utiliza principalmente para el cultivo de biopsias de tejido y algunos cultivos de linfocitos. y algo de apoyo al crecimiento celular difícil de cultivar. Por ejemplo, fibroblastos del sarcoma de rata Jensen, linfocitos humanos, HT-29, BHL-100 y otras células epiteliales.
El medio de cultivo L-15 es adecuado para el cultivo de células tumorales de rápida proliferación y se utiliza para cultivar líneas celulares tumorales en ausencia de CO2. Este medio de cultivo utiliza un sistema tampón fosfato, la composición de aminoácidos se mejora aún más y la glucosa se reemplaza por galactosa.
No existen estándares determinados para elegir un medio de cultivo. Hay algunas sugerencias como referencia:
(1) El medio de cultivo utilizado para establecer una determinada línea celular debe cultivarse en. De esta manera, el medio de cultivo preferido para sembrar células. Puedes consultar las referencias o consultar a la hora de adquirir líneas celulares. También puede buscar en los sitios web de algunas empresas biológicas. Por ejemplo, el sitio web de Invitrogen tiene una herramienta de base de datos de líneas celulares. Seleccione el tipo de célula que le interesa y aparecerán medios, sueros, reactivos de transfección, etc. y, a veces, el procedimiento de transfección optimizado es muy conveniente.
(2) Es posible que desee probar otros medios utilizados habitualmente en los laboratorios. Muchos medios pueden ser adecuados para una variedad de células.
(3) Seleccionar el medio de cultivo según las características de la línea celular y las necesidades del experimento. Por ejemplo, elija RPMI1640 para líneas celulares de ratón.
(4) Utilice una variedad de medios de cultivo para cultivar las células objetivo y observar su estado de crecimiento. Puede utilizar curvas de crecimiento, tasas de formación de colonias y otros indicadores para juzgar y seleccionar el mejor medio de cultivo en función. los resultados experimentales. Este es el método más objetivo, pero es más engorroso.