¿Cómo preparar licor madre y medio de cultivo?

La preparación del medio de cultivo es el primer paso en el cultivo de tejidos florales. La composición del medio de cultivo debe variar según los tipos de flores, los diferentes explantes y las diferentes etapas de cultivo. En general, varios medios de cultivo contienen macroelementos, oligoelementos, vitaminas, hormonas, azúcar y agar y, en ocasiones, se añaden al medio de cultivo complementos orgánicos como carbón activado, jugo de plátano, jugo de coco, etc. En producción, primero seleccionamos la fórmula del medio de cultivo existente, que es el resultado de investigaciones previas y ha sido verificada por la práctica de producción. Hoy en día, existen fórmulas nutricionales básicas para casi todos los tipos de flores, lo que puede ahorrarle la molestia de realizar más investigaciones. Por supuesto, en la práctica de producción, también se pueden mejorar adecuadamente. Si no puede encontrar una fórmula adecuada, puede probar primero el medio MS. MS es la abreviatura de Murashige y Skoog, quienes desarrollaron este medio en 1962. A continuación se toma el medio de cultivo MS como ejemplo para presentar cómo prepararlo.

(1) Preparar licor madre. Los elementos necesarios en el medio de cultivo se pesan 50 veces, 100 veces o 1000 veces la cantidad de la fórmula original para hacer una solución concentrada. Esta solución concentrada se llama licor madre. Al preparar el medio de cultivo, mida la solución madre en proporción y dilúyala hasta la concentración requerida. Una vez preparado el licor madre, etiquételo y colóquelo en el frigorífico a una temperatura de 0 a 4 °C. Puede utilizarse durante medio año a un año. No se deben colocar en el mismo recipiente cosas que puedan producir reacciones químicas o precipitar después de la disolución. Se debe utilizar agua bidestilada para preparar las aguas madre. Los medicamentos deben ser de grado analítico o de pureza química de grado superior. El pesaje de los medicamentos y el volumen de los líquidos de los medicamentos deben ser precisos. Licor madre ①: 18,5 gramos de sulfato de magnesio, 82,5 gramos de nitrato de amonio, 95,0 gramos de nitrato de potasio. Añadir agua para ajustar el volumen a 1000 ml. La concentración es 50 veces mayor que la del medio de cultivo. Al preparar 1 litro de medio de cultivo, medir 20 ml de solución madre. Licor madre ②: 22,0 gramos de cloruro de calcio. Añadir agua para ajustar el volumen a 500 ml. La concentración es 100 veces la del medio de cultivo. Al preparar 1 litro de medio de cultivo, medir 10 ml de solución madre. Licor madre ③: 8,5 gramos de dihidrógenofosfato de potasio. Añadir agua para ajustar el volumen a 500 ml. La concentración es 100 veces la del medio de cultivo. Al preparar 1 litro de medio de cultivo, medir 10 ml de solución madre. Licor madre ④: 3,73 gramos de etilendiaminotetraacetato disódico, 2,78 gramos de sulfato ferroso. Añadir agua para ajustar el volumen a 1000 ml. La concentración es 100 veces la del medio de cultivo. Al preparar 1 litro de medio de cultivo, medir 10 ml de solución madre. Licor madre ⑤: 620 mg de ácido bórico, 2230 mg de sulfato de manganeso, 860 mg de sulfato de zinc, 2,5 mg de sulfato de cobre, 83 mg de yoduro de potasio, 25 mg de molibdato de sodio, 2,5 mg de cloruro de cobalto. Añadir agua para ajustar el volumen a 1000 ml. La concentración es 100 veces la del medio de cultivo. Al preparar 1 litro de medio de cultivo, medir 10 ml de solución madre. Licor madre ⑥: 5 gramos de mioinositol, 100 mg de glicina, 25 mg de niacina, 25 mg de clorhidrato de piridoxina y 5 mg de clorhidrato de tiamina. Añadir agua para ajustar el volumen a 500 ml. La concentración es 100 veces la del medio de cultivo. Al preparar 1 litro de medio de cultivo, medir 10 ml de solución madre.

(2) Preparar medio de cultivo. Para preparar cada 1000 ml de medio de cultivo, pesar de 6 a 10 gramos de agar como coagulante, pesarlo según los requisitos de la fórmula y disolverlo lentamente en un baño de agua. Primero ponga una cierta cantidad de agua en el cilindro medidor y mida el licor madre de acuerdo con el orden y la cantidad especificada de licor madre. Después de agregar las aguas madre, agregue sustancias reguladoras del crecimiento como el ácido indol acético o el ácido naftaleno acético y de 0,04 a 10 mg de citoquininas por litro de medio de cultivo según sea necesario. La citoquinina más utilizada es la 6-benciladenina. verter en el agar derretido. Agregar 30 gramos de sacarosa por 1000 ml de medio de cultivo o según sea necesario y ajustar al volumen requerido. Continúe calentando hasta que el agar se derrita por completo. Utilice ácido clorhídrico o hidróxido de sodio para ajustar el pH del medio de cultivo. El pH de la mayoría de los medios de cultivo está entre 5,4 y 6,0, y el pH del medio de cultivo MS es 5,7. Vierta el medio de cultivo preparado en el recipiente de cultivo mientras esté caliente. El medio de cultivo representa de 1/3 a 1/4 del volumen del recipiente. No permita que el medio de cultivo entre en contacto con las paredes del recipiente, de lo contrario podría infectarse fácilmente con diversas bacterias. Luego cúbralo a tiempo y realice la esterilización a alta presión. Durante la esterilización, utilícelo de acuerdo con los procedimientos operativos del esterilizador de alta presión. Mantener a 121°C y presión 111 kPa durante 15 a 20 minutos, debiendo controlarse estrictamente la temperatura y el tiempo. Cuando se acabe el tiempo, corte la energía inmediatamente. Cuando la presión en la olla a presión baje a la presión normal, abra la válvula de liberación, abra la tapa, saque el medio de cultivo esterilizado, colóquelo en la sala de inoculación y cultívelo. 3 días. Puede usarse solo después de que no esté infectado.