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¿Cuáles son las tres bases en un promotor?

Los promotores regulables comúnmente utilizados en los sistemas de expresión procarióticos incluyen Lac (promotor de lactosa), Trp (promotor de triptófano), Tac (promotor híbrido de lactosa y triptófano), lPL (promotor hacia la izquierda del fago l), promotor del fago T7. , etc.

(1) Promotor Lac: Proviene del operón lactosa de Escherichia coli. Es una secuencia de nucleótidos direccional en la molécula de ADN. Está formada por un gen de la proteína represora (LacI), un gen promotor (P). ), consta de un gen operador (O) y una estructura genética que codifica tres enzimas relacionadas con la utilización de la lactosa. El promotor Lac está regulado positivamente por el sistema catabólico y negativamente por el represor. La regulación positiva activa el promotor a través de factores CAP (proteína de activación del gen catabolito) y AMPc para promover la transcripción. La regulación negativa es la producción de la proteína represora LacZ por parte del gen regulador, que puede unirse al gen operador para impedir la transcripción. La lactosa y ciertos análogos como el IPTG pueden formar complejo con la proteína represora, cambiando su configuración y siendo incapaz de unirse al gen O, liberando así esta represión e induciendo la transcripción.

(2) promotor trp: Proviene del operón triptófano de E. coli, y su proteína represora debe unirse al triptófano para ser activa. Este promotor inicia la transcripción cuando falta triptófano. Cuando el triptófano es abundante, cesa la transcripción. El ácido b-indol acrílico puede inhibir competitivamente la unión del triptófano a la proteína represora, aliviar la actividad de la proteína represora y promover la transcripción del promotor trp.

(3) Promotor Tac: El promotor Tac es un grupo de promotores híbridos construidos artificialmente a partir de promotores Lac y trp. Está regulado negativamente por la proteína represora Lac y tiene una mayor capacidad de inicio que los promotores Lac y trp. fuerte. Tac 1 está compuesto por la región -35 del promotor Trp más un fragmento de ADN sintético de 46 pb (incluida la caja Pribnow) y el gen operador Lac Tac 12 está compuesto por la región -35 del promotor Trp y -10 del promotor Trp. Región promotora Lac, más la parte operadora del operón Lac y la secuencia SD. El promotor Tac es inducido por IPTG.

(4) Promotor lPL: Proviene del promotor de transcripción temprano dirigido a la izquierda del fago l y es un promotor fuerte aproximadamente 11 veces más activo que el promotor Trp. El promotor lPL está controlado por el represor cIts857 sensible a la temperatura. A baja temperatura (30°C), la proteína represora cIts857 puede inhibir la transcripción del promotor PL. A alta temperatura (45°C), la proteína cIts857 se inactiva, se libera la represión y se promueve la transcripción del promotor PL. Debido a que el sistema se ve afectado por cIts857, es particularmente adecuado para expresar productos genéticos que son tóxicos para E. coli. La desventaja es que la conversión de temperatura no solo puede inducir el promotor PL, sino también inducir genes de choque térmico, algunos de los cuales codifican proteasas. . Esta contradicción puede aliviarse si se utilizan lisógenos del fago cI+ y se inducen con mitomicina C o ácido nalidíxico.

(5) Promotor del fago T7: Es un promotor del fago T7 y es altamente específico. Sólo la ARN polimerasa T7 puede iniciarlo, por lo que el gen clonado puede expresarse solo. La eficiencia de la ARN polimerasa de T7 es aproximadamente 5 veces mayor que la de la ARN polimerasa de E. coli. Puede permitir que el plásmido se transcriba continuamente a lo largo de la plantilla durante varias semanas. Muchos terminadores exógenos no pueden terminar su secuencia de manera efectiva, por lo que pueden transcribir algunos. secuencias que no pueden ser transcritas por el intestino grueso. Secuencias transcritas eficientemente por la ARN polimerasa de Bacillus. Este sistema puede expresar genes de manera eficiente que otros sistemas no pueden. Pero tenga en cuenta que cuando se utiliza este promotor, el huésped debe contener ARN polimerasa T7. La aplicación del sistema de expresión del fago T7 requiere dos condiciones: la primera es tener ARN polimerasa del fago T7, que puede ser producida por el fago infectado o por una copia del gen insertada en el cromosoma de E. coli; la banda aguas arriba de un gen que va a expresarse. Vector con el promotor del fago T7.

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¿Cuáles son los elementos promotores ascendentes de los eucariotas?

Existen Hay tres tipos de promotores eucariotas, que son transcritos por las ARN polimerasas I, II y III respectivamente. Promotor de clase I: solo controla la transcripción de genes precursores de rRNA, y las transcripciones se escinden y procesan para generar varios rRNA maduros. Los promotores de categoría I se componen de dos partes de secuencias conservadas: promotor central: ubicado cerca del punto de inicio de la transcripción, de -45 a +20; elemento de control aguas arriba (UCE): ubicado de -180 a -107; requiere la participación de la ARN polimerasa I; de dos factores para su transcripción: UBF1: una cadena polipeptídica con un M de 97.000, que se combina en la región rica en GC de las dos partes anteriores 1 TBP, que es la proteína de unión a TATA (TBP SL1): una tetramérica; proteína que contiene tres cofactores de transcripción diferentes TAF I; bajo la mediación del factor SL1, la ARN polimerasa I se une al punto de inicio de la transcripción e inicia la transcripción. Promotores de clase II: Los promotores de clase II participan en el control de la expresión de numerosos genes codificadores de proteínas. Este tipo de promotor contiene 4 tipos de elementos de control: 1. Promotor basal: la secuencia es una región conservada de 7 pb centrada alrededor de -25 a -30, TATAAAA/T, llamada caja TATA o caja Goldberg-Hogness. Relevante para el posicionamiento de la ARN polimerasa, donde las dobles hebras del ADN se desenrollan y determinan el punto de partida de la transcripción. Sin la caja TATA, la transcripción comenzará en muchos sitios. 2 Iniciador: una secuencia conservada en el punto de inicio de la transcripción. La secuencia más común es: PyPyANT(A)PyPy es una base de pirimidina (C o T), N es cualquier base y A es el punto de inicio de la transcripción. . Aquí el ADN se desenvuelve y comienza la transcripción. 3 elementos ascendentes (factor ascendente): los elementos ascendentes comunes incluyen caja CAAT, caja GC y caja octámero, etc. La única secuencia de la caja CAAT es GCCAATCT, la última secuencia de la caja GC es GGGCGG y CCGCCC, la caja del octámero contiene 8 pb y la última secuencia es ATGCAAAT 4 elementos de respuesta (elemento de respuesta): producción de regulación inducida El activador transcripcional; se une al elemento de respuesta en el gen diana. Por ejemplo, la secuencia *** del elemento de respuesta al choque térmico HSE es CNNGAANNTCCNNG, que puede ser reconocida y sobre la que puede actuar el factor de choque térmico HSF; la secuencia *** del elemento efector del suero SRE es CCATATTAGG, que puede reconocerse; y actúa sobre él el efector sérico SRF. Hay una gran cantidad de factores involucrados en el inicio de la transcripción de la ARN polimerasa II, que se pueden dividir en tres categorías: 1. Factor general: el cofactor que actúa sobre el promotor básico se llama factor (de transcripción) general (GTF). O factor de transcripción básico (transcripción basal), que es necesario para el inicio de la transcripción a partir de cualquier promotor celular de tipo II, representado por TFIIX, donde X se nombra con letras inglesas en el orden de descubrimiento, como TFIIA, TFIIID y TFIIH. . 2 Factor ascendente: o factor auxiliar de transcripción, se refiere a un factor de transcripción que reconoce elementos ascendentes. 3. Factores inducibles: en eucariotas, la expresión genética relacionada con los tipos de células y las etapas de desarrollo se regula principalmente mediante la síntesis de novo de factores de transcripción, que es un proceso a largo plazo. La rápida respuesta a estímulos externos está regulada principalmente por la inducibilidad del activador de la transcripción. Estos activadores transcripcionales inducidos se unen a los llamados elementos de respuesta de los genes diana. Promotor de clase III: el promotor de clase III es reconocido por la ARN polimerasa III y participa en la transcripción de algunas moléculas pequeñas de ARN. El promotor de la ARN polimerasa III tiene tres tipos de estructuras: Promotor intragénico tipo 1: Por ejemplo, el promotor del gen 5S rRNA se ubica aguas abajo del punto de inicio de la transcripción, es decir, dentro del gen. dos secuencias estructurales Reconocidas por 3 cofactores. El promotor del gen 5S rRNA consta de tres elementos: caja A, elemento intermedio y caja C. TFIIIA se une al marco A, lo que luego hace que TFIIIC se una. Esta última unión hace que TFIIIB se una cerca del punto de inicio de la transcripción y guía a la ARN polimerasa III para que se una al punto de inicio. TFIIIB permite el posicionamiento correcto de la ARN polimerasa III y funciona como un "factor de posicionamiento". Promotor intragénico tipo 2: como el promotor de un gen de ARNt, que tiene dos elementos de control, a saber, el marco A y el marco B.

TFIIIC se une al marco B, y su región de unión incluye el marco A y el marco B, lo que luego hace que TFIIIB se una cerca del punto de inicio de la transcripción y guía a la ARN polimerasa III para que se una al punto de inicio. 3 Promotor aguas arriba: como el promotor del gen snRNA, ubicado aguas arriba del punto de inicio de la transcripción. Hay tres elementos aguas arriba: OCT (motivo octámero), PSE (elemento de secuencia proximal) y elemento TATA. En el promotor aguas arriba de la ARN polimerasa III, la transcripción sólo puede iniciarse si el elemento TATA está presente cerca del origen. Sin embargo, la presencia de elementos PSE y OCT aumentará la eficiencia de la transcripción.

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¿Cuáles son los promotores bacterianos?

El promotor bacteriano contiene varias secuencias dispersas, Región -35, extendida - Región 10, región -10, la región de reconocimiento del factor sigma y el elemento UP reconocido por el dominio carboxilo terminal de la subunidad alfa. Todas las bacterias poseen un factor sigma esencial, llamado factor sigma de mantenimiento (por ejemplo, σ70 en E. coli; también conocido como RpoD), que es responsable del reconocimiento de la mayoría de los promotores (Fig. 1b). El factor sigma de limpieza consta de cuatro dominios conectados por enlaces flexibles. En la holoenzima de la ARN polimerasa, los factores sigma se unen a subunidades de la enzima central de modo que cada dominio del factor sigma interactúa con elementos promotores específicos. La función principal de los dominios 3 y 4 del factor sigma es el posicionamiento inicial de la ARN polimerasa, y la función principal de los dominios 1 y 2 es promover la formación de complejos abiertos. Otra función del factor sigma de mantenimiento está regulada por el dominio 1, que garantiza que el ADN no entre en la región activa antes de que el ARN se una al promotor. Cuando la ARN polimerasa se une al promotor, desencadena un cambio conformacional para permitir que el ADN entre en la región activa. región. Información ampliada Enfermedades con variación funcional del promotor: Se confirma a partir de la herencia mendeliana en el hombre (OMIM) que las siguientes están relacionadas con el fallo del promotor, ya sea debido a mutaciones directas en la secuencia del promotor o mutaciones en factores de transcripción o factores estimulantes de factores de transcripción. Varios cánceres que no figuran en la lista se deben a genes mosaicos que surgen de translocaciones cromosómicas: asma, beta-talasemia, síndrome de Rubinstein Taibbi. Cabe señalar que la mayoría de las enfermedades tienen una etiología heterogénea y, a nivel molecular, una enfermedad a menudo se refiere a múltiples enfermedades, incluso si sus síntomas y tratamientos son los mismos. Las enfermedades tienen diferentes respuestas a los tratamientos debido a diferencias en las fuentes moleculares subyacentes. Esta sería la categoría de farmacogenética. Enciclopedia Baidu - Promotor

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El ácido b-indol acrílico puede inhibir competitivamente la unión del triptófano a la proteína represora, aliviar la actividad de la proteína represora y promover la transcripción del promotor trp.

(5) Promotor del fago T7: Es un promotor del fago T7 y es altamente específico. Sólo la ARN polimerasa T7 puede iniciarlo, por lo que el gen clonado puede expresarse solo. La eficiencia de la ARN polimerasa de T7 es aproximadamente 5 veces mayor que la de la ARN polimerasa de E. coli. Puede permitir que el plásmido se transcriba continuamente a lo largo de la plantilla durante varias semanas. Muchos terminadores exógenos no pueden terminar su secuencia de manera efectiva, por lo que pueden transcribir algunos. secuencias que no pueden ser transcritas por el intestino grueso. Secuencias transcritas eficientemente por la ARN polimerasa de Bacillus. Este sistema puede expresar genes de manera eficiente que otros sistemas no pueden. Pero tenga en cuenta que cuando se utiliza este promotor, el huésped debe contener ARN polimerasa T7. La aplicación del sistema de expresión del fago T7 requiere dos condiciones: la primera es tener ARN polimerasa del fago T7, que puede ser producida por el fago infectado o por una copia de un gen insertada en el cromosoma de E. coli; la segunda es tener una banda; aguas arriba de un gen a expresar Vector con promotor del fago T7.

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