¿Cuáles son las condiciones estándar para la inactivación del complemento?
A. ¿Cuál es el significado rector de la inactivación del complemento para la tecnología inmunológica?
Inactiva el complemento en los productos sanguíneos, especialmente en el suero, sin inactivarlo. Los productos sanguíneos tienen un efecto hemolítico. Después de ser inactivados a 56 grados durante 30 minutos, el complemento pierde su actividad y no tiene ningún efecto dañino sobre las células.
B. Inactivación del complemento
El sistema del complemento (sistema del complemento
) es un grupo de sistemas no específicos y obligatorios que existen en el suero fresco normal de humanos y vertebrados. Está relacionado con la actividad enzimática.
A finales del siglo XIX, durante el estudio de la bacteriólisis inmune y las reacciones hemolíticas inmunes, se creía que esta globulina era una sustancia que asistía a la lisis celular de los anticuerpos, de ahí el nombre de complemento. El complemento consta de 9 componentes, denominados c1, c2, c3,..., c9. c1 tiene
3 subunidades, a saber, c1q,
c1r y c1s. A excepción de c1q, la mayoría de los demás componentes existen en el suero en forma de precursores enzimáticos y necesitan ser activados por complejos antígeno-anticuerpo u otros factores antes de que puedan ejercer actividad biológica. Esto se denomina vía de activación clásica del complemento. En los últimos 20 años, se han descubierto la vía de activación alternativa y otras vías de activación. También se ha descubierto que muchos otros factores en el suero están involucrados en el proceso de activación de estas vías. Además, también lo han hecho muchos factores que inactivan el complemento. sido descubierto. Por lo tanto, los factores relacionados con la actividad del complemento y su regulación se denominan colectivamente sistema del complemento. Actualmente se cree que el sistema del complemento es un sistema multicomponente compuesto por más de 20 proteínas séricas diferentes, con al menos dos vías de activación diferentes.
C. Proceso de activación del sistema del complemento
El organismo regula el proceso de activación del sistema del complemento a través de una serie de factores complejos para que responda adecuadamente . Por ejemplo, la vía de retroalimentación positiva a través de C3b puede amplificar los efectos biológicos del complemento. Sin embargo, si el sistema del complemento está sobreactivado, no solo consumirá una gran cantidad de componentes del complemento y reducirá la capacidad antiinfecciosa del cuerpo, sino que también producirá una gran cantidad de sustancias biológicamente activas durante el proceso de activación, lo que provocará que el cuerpo; sufrir una reacción inflamatoria grave o causar daño tisular, provocando un proceso patológico. Esta sobreactivación y sus consecuencias adversas pueden evitarse mediante mecanismos regulatorios. Este mecanismo regulador incluye la tendencia de los productos de escisión de ciertos componentes del sistema del complemento a descomponerse por sí solos y los efectos reguladores de una variedad de inhibidores y factores de inactivación.
Regulación de la autodesintegración
Los productos de escisión de ciertos componentes del complemento son extremadamente inestables y propensos a la autodesintegración, convirtiéndose en un mecanismo de autocontrol en el proceso de activación del complemento. Por ejemplo, la desintegración espontánea de C2b en el complejo C42 puede impedir que C42 active continuamente C3, limitando así la reacción en cadena de los componentes posteriores del complemento. C5b también es propenso a descomponerse por sí solo, lo que afecta la unión de C6-C9 a la membrana celular.
Regulación de sustancias letales en los fluidos corporales
El suero contiene una variedad de componentes del complemento que inhiben o inactivan componentes específicos del complemento.
Inhibidor de CI: El inhibidor de CI (CIINH) puede combinarse irreversiblemente con CI, haciendo que este último pierda su actividad esterasa y ya no escinda C4 y C2, es decir, ya no formará C42 (enzima de conversión de C3). ), bloqueando o alterando así las respuestas posteriores de los componentes del complemento. Los pacientes con deficiencia hereditaria de CIINH pueden desarrollar angioedema subcutáneo, principalmente centrado en la cara, y a menudo se caracterizan por angioedema localizado en el tracto digestivo o la mucosa respiratoria. El mecanismo es que el CI no se inhibe y el C2a (anteriormente conocido como un pequeño fragmento de C2b) producido después de interactuar con C4 y C2 es una cinina del complemento o mejora la permeabilidad vascular, lo que produce inflamación vasogénica.
Cuando el CIINH es defectuoso, C4 y C2 se activan continuamente, por lo que los niveles de C4 y C2 en el cuerpo disminuyen porque no se puede formar C42 efectivo (C3 convertasa) en la fase sólida, C3 y su posterior; Los ingredientes no están activados. Por lo tanto, esta enfermedad no es tan propensa a infectarse como la deficiencia de C3-C8.
La mayoría de los pacientes con deficiencia de CIINH están relacionados genéticamente y alrededor del 15% de los pacientes no tienen antecedentes genéticos. Aunque su CIINH es antigénico, está inactivo (algunos pueden producir CIINH normal, pero no son completamente defectuosos). . El primero se denomina angioedema tipo I y el segundo, angioedema tipo II (Alsenz et al., 1987).
El angioedema se puede tratar con CIINH purificado, que se dice que es eficaz. También se pueden administrar preparaciones de hormonas masculinas para estimular que el hígado sintetice CIINH y prevenir la aparición de edema.
Proteína de unión a C4: La proteína de unión a C4 (C4bp) puede inhibir competitivamente la unión de C4b y C2b, inhibiendo así la formación de C42 (C3 convertasa).
Factor I: El factor I, también conocido como inactivador de C3b (C3b INA), puede escindir C3b y convertirlo en C3bi inactivo, provocando así que C42 y C3bBb pierdan su combinación con C3b para formar la convertasa C5. .
Cuando se produce una deficiencia hereditaria del factor I, el C3b no se inactiva sino que persiste en la sangre, lo que puede actuar como una retroalimentación positiva en la vía de derivación, escindiendo gradualmente el C3 y produciendo más C3b. Por tanto, los niveles de factores C3 y B en sangre disminuyen debido al consumo. Cuando se produce una infección bacteriana, los componentes principales del sistema del complemento, los factores C3 y B, presentan una deficiencia grave, lo que debilita el efecto antiinfeccioso y puede provocar consecuencias graves o incluso mortales debido a bacterias patógenas oportunistas.
Factor H: Aunque el factor H puede inactivar C3b, no puede inactivar C3b en C3bBb. El factor H (factor H) no solo puede promover la velocidad de inactivación de C3b por el factor I, sino que también inhibe competitivamente la unión del factor B y C3b. También puede hacer que C3b se desplace de C3bBb, acelerando así la inactivación de C3bBb. Se puede observar que el factor I y el factor H desempeñan un papel regulador importante en la vía alternativa.
Proteína S: La proteína S puede interferir en la unión de C5b67 a la membrana celular. Aunque C5b67 puede unirse a C8 y C9, si no se une a la membrana celular (incluidas otras células adyacentes a la célula objetivo), no provocará la lisis celular.
Proteína de unión a C8: La proteína de unión a C8 (C8bp) también se llama factor de restricción homólogo (HRF). La combinación de C56 y C7 para formar C567 se puede insertar en la estructura bicapa de fosfolípidos de la membrana celular, pero antes de que los dos se combinen, pueden fluir libremente en los fluidos corporales. Por lo tanto, la membrana celular a la que se une C567 no se limita a la superficie de células extrañas que provocan la activación del complemento, sino que también tiene la oportunidad de unirse a sus propias células y luego formar un complejo macromolecular C5-9 con componentes posteriores, que se unirán. Dañar la perforación de la membrana celular. Esto también afectará a las células propias adyacentes al sitio de activación del complemento.
C8bp puede impedir la unión de C8 y C9 en C5678, evitando así daños en su propia membrana celular. La unión entre las moléculas C8 y C8bp es específica de especie, es decir, el C8 en C5678 reacciona con C8bp de la misma especie pero no reacciona con C8 de animales del sexo opuesto, por lo que también se le llama HRF. Se dice que C8bp también puede inhibir el efecto letal de las células NK y Tc, lo cual vale la pena señalar.
D. ¿Qué método se utiliza para inactivar el complemento en suero?
Antes de la prueba de unión del complejo del complemento, es necesario inactivar el suero que se va a analizar. Generalmente se calienta a 56°C. durante 30 minutos.
Para inactivar el suero fetal bovino se suele calentar al baño maría el suero que ha sido completamente descongelado. Cabe destacar que el suero debe agitarse de forma regular y uniforme durante el proceso de calentamiento.
El motivo de esto es desactivar los componentes del complemento en el suero. Sin embargo, la inactivación del suero fetal de ternera no es un requisito obligatorio, pudiendo el cliente elegir si desea realizar un tratamiento de extinción de incendios.
(4) Las condiciones estándar para inactivar el complemento son lectura extendida
Triglia y Linscott una vez midieron los componentes del complemento en suero fetal bovino comercial y encontraron que el suero fetal bovino contenía C1 y C6. sólo representan del 1 al 3% del suero de animales adultos, mientras que otros componentes del complemento representan sólo del 5 al 50% de los animales adultos. En cuanto al componente principal del complemento, C3, es casi indetectable en el suero bovino fetal.
Pinyopummintr et al. demostraron que la etapa de eliminación e inactivación del suero no afecta al desarrollo y diferenciación de los embriones bovinos. Otro estudio ha confirmado que el paso de inactivación por calor debilita el efecto promotor de la adhesión del suero fetal bovino y del suero de ternera sobre las células.
E. ¿Qué impacto tiene la activación o inactivación del complemento en la estabilidad del ambiente interno de todo el cuerpo?
El impacto de la activación o inactivación del complemento en la estabilidad del ambiente interno de todo el cuerpo El ambiente interno se explica con ejemplos. ¿Cómo mantiene el complemento el equilibrio dinámico del ambiente interno del cuerpo? El complemento (plemento) es un grupo de globulinas termolábiles con actividad similar a una enzima que existe en el plasma fresco normal de humanos y animales. Tiene las funciones de regular la fagocitosis, matar bacterias, disolver virus, mediar en la inflamación, regular la respuesta inmune y disolver y eliminar complejos inmunes. A finales del siglo XIX, durante el estudio de la bacteriólisis inmune y las reacciones hemolíticas inmunes, se creía que esta globulina es una sustancia que ayuda en la citólisis de los anticuerpos, de ahí su nombre complemento. El complemento consta de 9 componentes, denominados C1, C2, C3,..., C9. C1 tiene tres subunidades, a saber, C1 q. La mayoría de sus componentes están presentes en el suero en forma de precursores de enzimas. El sistema del complemento está compuesto por más de 30 proteínas globulinas no específicas ampliamente presentes en el suero fresco normal de humanos y vertebrados. Está compuesto por componentes intrínsecos del complemento, receptores del complemento, proteínas reguladoras del complemento del plasma y de la membrana celular y otras proteínas. Así obtenemos C1 r y C1 s. Además de C1q, otra activación del complemento se refiere al proceso de convertir el complemento de una forma inactiva a una forma activa. Se refiere a las tres vías de activación del complemento que hacen que cada componente intrínseco del complemento se active en secuencia bajo la acción de ciertos activadores para formar una enzima activa. Las tres vías de activación del complemento son la vía clásica, la vía alternativa y la vía MBL. ¿Activación del sistema del complemento? (1) ¿Vía clásica? (2) ¿Vía alternativa? (3) Vía MBL C4b2aC4b2a3b La inactivación del complemento es la inactivación del complemento en los productos sanguíneos, especialmente en el suero. Los productos sanguíneos que no inactivan el complemento tienen un efecto hemolítico. Después de la inactivación a 56 grados Celsius durante 15 a 30 minutos o 61 grados Celsius durante 2 minutos, el complemento pierde su actividad y no tiene ningún efecto dañino sobre las células. Retorno La mayoría de las células del cuerpo no están en contacto directo con el ambiente externo, sino que viven en el líquido extracelular y mantienen sus actividades vitales a través del constante intercambio material con el líquido extracelular. Este líquido extracelular que constituye el entorno de vida de las células se denomina entorno interno para distinguirlo del entorno externo del que depende todo el cuerpo para sobrevivir. El cuerpo humano utiliza la digestión, la respiración, la circulación sanguínea, la excreción, el sistema inmunológico y otros sistemas, la respiración. , circulación sanguínea, excreción, sistema inmunológico y otros sistemas. Bajo la regulación de sus propios nervios y hormonas, la homeostasis significa que el cuerpo coordina las actividades de varios sistemas y órganos a través de la regulación, y simultáneamente mantiene la relativa estabilidad del entorno interno. La activación del complemento a partir de los propios nervios y hormonas tiene un impacto en el entorno de todo el cuerpo. Durante el proceso de activación del complemento se producen diversos fragmentos de escisión que median en diversas funciones biológicas, como la disolución y la muerte mediante la unión. receptores correspondientes en la membrana celular. Inmunidad Adhesión, condicionamiento y efectos mediadores inflamatorios. 1. Efecto de disolución y destrucción: significa que después de que las bacterias ingresan al cuerpo, el lipopolisacárido de la pared celular bacteriana puede activar C3 a través de la vía de activación alternativa (inmunidad no específica), y las bacterias pueden activar el complemento a través de la vía de activación clásica después de unirse a células específicas. anticuerpos (específicos y Después de combinar los anticuerpos específicos, el complemento se puede activar a través de la vía de activación clásica (inmunidad específica). 2. La adhesión inmune se refiere a la capacidad de las partículas o complejos antígeno-anticuerpo que se unen a C3b para adherirse a los glóbulos rojos y plaquetas y luego inmuniza. El complejo se transfiere al hígado y al bazo y los macrófagos lo eliminan. Este es un mecanismo importante para que el cuerpo elimine los complejos inmunes circulantes. 3. Opsonización: se refiere a la unión de C3b, C4b e iC3b. bacterias u otras partículas a través de CR1 en la superficie de los fagocitos. CR3 y CR4 se combinan para promover la fagocitosis. Esta fagocitosis reguladora puede ser uno de los principales mecanismos del cuerpo para resistir infecciones bacterianas y fúngicas sistémicas. 4. Efectos mediadores inflamatorios: divididos en quimiotaxis. y efectos de anafilatoxina, significa que C3a, C5a, C567, etc. liberados durante el proceso de activación del complemento tienen un efecto quimiotáctico sobre los neutrófilos y macrófagos, atrayéndolos para que migren y se concentren en el sitio donde existen los patógenos, la fagocitosis, y también provocan una fagocitosis. Respuesta inflamatoria. El efecto de la anafilatoxina significa que C3a y C5a pueden inducir a los mastocitos y plaquetas a liberar sustancias farmacológicamente activas como la histamina, provocando así reacciones de hipersensibilidad como la contracción del músculo liso y un aumento de la permeabilidad vascular.
Todas estas funciones biológicas producidas por la activación del complemento desempeñan un papel en el mantenimiento de la estabilidad del entorno interno del cuerpo. El impacto de la inactivación del complemento en el entorno interno de todo el cuerpo. Si el sistema del complemento está sobreactivado, no solo consumirá una gran cantidad de componentes del complemento, sino que también reducirá la capacidad del cuerpo para resistir infecciones. Además, una gran cantidad de sustancias activas derivadas producidas durante el proceso de activación provocarán una reacción inflamatoria grave en el organismo o provocarán daño tisular, provocando procesos patológicos. Esta sobreactivación y sus consecuencias adversas pueden evitarse mediante la inactivación del complemento. El suero contiene inhibidores o factores inactivadores de una variedad de componentes del complemento, que pueden inactivar componentes específicos del complemento respectivamente para mantener la estabilidad del entorno interno del cuerpo. Hará que el cuerpo sufra una inflamación grave y el complemento desempeña la función de eliminar los complejos inmunitarios, inhibir la formación de nuevos complejos inmunitarios y eliminar las células apoptóticas para mantener la estabilidad del entorno interno del cuerpo. Complejos inmunes claros: una pequeña cantidad de CI continúa formándose en la circulación sanguínea del cuerpo. Cuando el antígeno es ligeramente mayor que el anticuerpo, el IC se deposita en la pared de los vasos sanguíneos y el C3b se produce activando el complemento CR1 en la superficie de los glóbulos rojos, se combina con el complejo inmunológico que transporta C3b y lo transporta al hígado, donde. está unido por el complejo inmunológico de C3b y transportado al hígado para su eliminación. Eliminación de células apoptóticas: en condiciones fisiológicas, el cuerpo a menudo produce una gran cantidad de células apoptóticas. La superficie celular expresa una variedad de autoantígenos si no se eliminan a tiempo, pueden causar enfermedades autoinmunes. Los componentes del complemento pueden reconocer y unirse a células apoptóticas y participar en la eliminación de estas células interactuando con los receptores de la superficie de los fagocitos. Excelente material educativo, ¡te lo mereces! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! ¡Al usarlo, elimine esta página directamente! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! ¡Al usarlo, elimine esta página directamente! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! Excelente material educativo, ¡te lo mereces! ¡Al usarlo, elimine esta página directamente!
F. Por qué es necesario el suero inactivado por calor
El calentamiento puede inactivar el sistema del complemento. Los cuerpos del complemento activados participan en eventos citolíticos, *** contracción del músculo liso, liberación de histamina de células y plaquetas y activación de linfocitos y macrófagos. Se recomienda el uso de suero inactivado por calor al realizar estudios inmunológicos y cultivar células ES, células de insecto y células de músculo liso. Vaya a Ayuda de biología para obtener más información, //bio1000/reseach/biomolecular/ Progreso de la investigación en biología molecular, experimentos de biología molecular, biología molecular moderna.