También hago purificación de proteínas. Hay una proteína que es muy complicada cuando se purifica por primera vez. ¿Te has encontrado con una situación similar antes? ¿Tienes alguna experiencia?xiexie
En general, la expresión soluble encontrará problemas similares. Personalmente, creo que se pueden considerar los siguientes aspectos:
Estudie detenidamente las instrucciones del relleno. También es una etiqueta His o. Relleno con etiqueta GST, pero es de un fabricante diferente o tiene resoluciones diferentes, sus tampones y concentraciones de elución son diferentes, ¡así que asegúrese de prestar atención! Por ejemplo, al seleccionar rellenos, puede elegir rellenos con partículas ligeramente más finas para lograr una mejor resolución.
Las proteínas contaminantes deben controlarse en cada etapa de la muestra. Tome la expresión soluble de etiqueta His más común, como ejemplo. Al cargar la muestra, agregue una concentración baja (5-10 mM de imidazol); después de cargar la muestra, lave varios volúmenes de columna más de tampón e imidazol de baja concentración (20-50 mM) para eliminar más proteínas impurezas (tenga en cuenta que este proceso también irá acompañado de la elución lenta de la proteína objetivo, lo que reducirá el rendimiento hasta cierto punto, por lo tanto, es necesario optimizar el tiempo y la concentración); luego use imidazol en gradiente para eluir la proteína objetivo. (Por lo tanto, es necesario observar la concentración óptima de elución de imidazol cuando se utiliza la elución en gradiente continuo por primera vez);
Si se optimiza un método (como la afinidad), algunas proteínas impurezas pueden ser que Es difícil de separar y aún no es suficiente para obtener la pureza ideal. Puede utilizar completamente el segundo paso de purificación, como el intercambio iónico, que a menudo logrará el doble de resultado con la mitad de esfuerzo, lo cual es más rentable que probar uno. método todo el tiempo.
Opiniones personales, bienvenidos a continuar la discusión y deseo que el experimento sea fluido.