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- Cómo construir un vector1 La selección y transformación de promotores son a menudo razones importantes por las que no se pueden obtener plantas transgénicas ideales. Debido a que los promotores desempeñan un papel clave en la determinación de la expresión genética, la primera consideración es seleccionar un promotor vegetal apropiado y aumentar su actividad. Actualmente, los promotores ampliamente utilizados en los vectores de expresión de plantas son promotores constitutivos. Por ejemplo, la mayoría de las plantas transgénicas dicotiledóneas utilizan el promotor C a M V 3 5 S, mientras que las plantas transgénicas monocotiledóneas utilizan principalmente el promotor U biquit in del maíz y el promotor Actin l del arroz. Bajo el control de estos promotores expresados constitutivamente, los genes extraños se expresarán en todas las partes de la planta transgénica y en todas las etapas de desarrollo. Sin embargo, la expresión continua de alta eficiencia de genes extraños en plantas receptoras no solo causa desperdicio, sino que a menudo también causa cambios morfológicos en las plantas y afecta su crecimiento y desarrollo. Para que los genes extraños desempeñen un papel eficaz en las plantas y reduzcan los efectos adversos en las plantas, la gente está prestando cada vez más atención a la investigación y aplicación de promotores de expresión específicos. Los promotores específicos descubiertos incluyen principalmente promotores específicos de órganos y promotores específicos de inducción. Por ejemplo, promotores específicos de semillas, promotores específicos de frutas, promotores específicos de células del mesófilo, promotores específicos de raíces, promotores inducidos por lesiones, promotores inducidos químicamente, promotores inducidos por luz, promotores inducidos por choque térmico, etc. La clonación y aplicación de estos promotores específicos sienta las bases para la expresión específica de genes extraños en plantas. Por ejemplo, la empresa suiza CBA-Geigey utiliza el promotor PR-IA para controlar la expresión de genes de la toxina Bt en tabaco transgénico. Dado que el promotor puede ser inducido por ácido salicílico y sus derivados, obviamente es un método muy eficaz para inducir la expresión de genes resistentes a insectos mediante la pulverización de productos químicos baratos y no contaminantes durante la temporada en la que reaparecen las plagas. En la investigación de plantas transgénicas, no se pueden obtener resultados satisfactorios utilizando promotores naturales. Especialmente cuando se realiza expresión específica y expresión inducida, los niveles de expresión son en su mayoría insatisfactorios. Transformar los promotores existentes y construir promotores compuestos será un enfoque muy importante. Por ejemplo, Ni et al. combinaron la región de activación de la transcripción del promotor del gen de la octopina sintasa con el promotor del gen de la manolina sintasa. Los resultados de la expresión de GUS mostraron que la actividad del promotor modificado era significativamente mayor que la del promotor 3 5 S. Wu Rui y otros combinaron el promotor inducible del gen PI-III con el intrón 1 del gen Actinl del arroz, y la actividad de expresión del nuevo promotor aumentó casi 10 veces (patente). Estos promotores artificiales desempeñan un papel importante en la investigación en ingeniería genética vegetal. 2. Mejorar la eficiencia de la traducción. Para mejorar la eficiencia de la traducción de genes extraños, los genes generalmente se modifican cuando se construyen vectores. Se consideran tres aspectos principales: 2.1 Agregar secuencias 5′-3′ no traducidas. Muchos experimentos han descubierto que la secuencia no traducida (UTR) 5′-3′ de genes eucariotas es muy necesaria para la expresión normal de genes. La eliminación de este segmento a menudo conduce a la estabilidad y el nivel de traducción del ARNm, como en el mosaico del tabaco. Hay un elemento ω que consta de nucleótidos de 68 pb aguas arriba del sitio de inicio de la traducción del gen de la proteína de 126 kDa del virus (TMV). Proporciona un nuevo sitio de unión para el ribosoma, que puede unirse a la actividad de traducción de nosotros. .Los genes aumentan decenas de veces. Actualmente, muchos vectores añaden secuencias potenciadoras de la traducción ω al extremo 5' de genes exógenos. Ingelbrecht et al. estudiaron las secuencias del extremo 3' de varios genes y descubrieron que la secuencia del extremo 3' del gen de la octopina sintasa puede aumentar la expresión transitoria del gen NPTI III en más de 20 veces. Además, las secuencias del extremo 3' de diferentes genes tienen diferentes eficiencias para promover la expresión génica. Por ejemplo, la secuencia terminal 3' de los glóbulos rojos promueve la expresión génica 60 veces más que el gen de la chalcona sintasa. 2.2 Optimizar la secuencia alrededor del codón de inicio Aunque el codón de inicio es universal en biología, los genes de diferentes fuentes biológicas tienen sus propias secuencias especiales alrededor del codón de inicio. Por ejemplo, las características típicas de la secuencia alrededor del codón de inicio de la planta es A A C C A U G C, y la secuencia alrededor del codón de inicio del animal es C A C C A U G, que es muy diferente de la de los procariotas. K o z a k estudió en detalle el efecto de la mutación dirigida al sitio de las bases alrededor del codón de inicio A T G sobre la transcripción y la traducción, y concluyó que en eucariotas, cuando la secuencia alrededor del codón de inicio es C C A T G G, la eficiencia de transcripción y traducción es la más alta, especialmente Las posiciones at-3 son muy importantes para la eficiencia de la traducción. Esta secuencia se conoció más tarde como secuencia k0z a K y se utilizó en la construcción de vectores de expresión. Por ejemplo, existe un gen de quitinasa bacteriana cuya secuencia de código inicial original es U U U A U G G. Cuando se modificó a A C C A U G G, su nivel de expresión en el tabaco se multiplicó por ocho. Por lo tanto, cuando se construye un vector de expresión utilizando genes no vegetales, se debe modificar de acuerdo con las características de la secuencia que rodea el codón de inicio de la planta. 2.3 Modificación de regiones codificantes de genes Si los genes extraños provienen de procariotas, los niveles de expresión de estos genes en las plantas suelen ser muy bajos debido a diferencias en los mecanismos de expresión.
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- Cómo escribir una carta de divulgación para solicitar una patente de modelo de utilidadLa divulgación técnica generalmente incluye seis elementos: información básica del solicitante, nombre de la invención, principio de invención, tecnología de fondo, invención específica Contenido y ventajas de la invención. También se debe adjuntar una ilustración de la invención. Los materiales de referencia incluyen documentos técnicos citados en "Invención e innovación", registros de datos experimentales durante el proceso de invención, informes de prueba de muestra, fotografías de muestra, etc. Introduciendo los derechos de propiedad intelectual de los elefantes. A veces, el inventor tiene una gran capacidad práctica pero una capacidad de expresión media y no puede describir claramente con palabras. En este momento, el inventor puede entregar primero el contenido de la descripción al agente, y el agente puede tener una comprensión preliminar, comunicarse con el inventor por teléfono o comunicación in situ y mejorar el documento de divulgación técnica a través de orientación. En ocasiones, aunque las empresas tienen innovaciones, no pueden dar explicaciones técnicas detalladas por falta de una gestión especializada. En este momento, puede recopilar tantos materiales de referencia como sea posible del agente, incluidas fotografías de la apariencia del producto, bocetos de diseño, opiniones de uso, registros de producción utilizados en la producción, estándares relevantes seguidos por el producto, grabaciones orales del personal de producción. , etc. , e incluso puede proporcionar instrucciones para los equipos de producción; aunque los materiales de referencia proporcionados están lejos de ser explicaciones técnicas, cuanto más se proporcionen, mejor podrá el agente comprender los productos relevantes y explorar completamente las posibles tecnologías patentadas a través de la comunicación con el inventor. y solicitud de la patente.
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- ¿Cómo solicitar la negación del delito en China? Las dificultades en la ejecución civil han traído grandes problemas a los órganos judiciales y a los acreedores de nuestro país. Después de largos procedimientos civiles, es posible que los acreedores finalmente tengan que demandar a las partes a través de tribunales penales para proteger sus derechos. Todo el proceso de solicitud de desestimación de un delito consiste en primero informar el caso a la agencia de seguridad pública, luego la agencia de seguridad pública recopila pruebas de la desestimación del delito y luego la fiscalía procesa y finalmente lleva a cabo un juicio. ¿Cómo solicitar la negación del delito en China? Según las disposiciones de la Ley de Procedimiento Penal, las causas penales generales suelen pasar por tres etapas, a saber, la etapa de investigación (órganos de seguridad pública), la etapa de revisión y enjuiciamiento (Fiscalía Popular) y la etapa de juicio (Tribunal Popular). 1. Etapa de investigación: Los órganos de seguridad pública podrán detener penalmente a los actuales infractores o a los principales sospechosos. Los detenidos deben ser interrogados dentro de las 24 horas siguientes a su detención. Después de que el organismo de investigación interroga a un sospechoso de un delito por primera vez o desde la fecha en que se adoptan las medidas obligatorias, el sospechoso de un delito puede contratar a un abogado para que le preste asistencia y lo represente en apelaciones y acusaciones. El abogado encargado tiene derecho a enterarse de la agencia de investigación sobre los cargos contra el sospechoso de un delito y puede reunirse con el sospechoso de delito bajo custodia para conocer la situación pertinente del sospechoso de delito. Si el órgano de seguridad pública considera necesario arrestar a una persona detenida, deberá someter el asunto a la Fiscalía Popular para su revisión y aprobación dentro de los tres días siguientes a la detención. En circunstancias especiales, el plazo de aprobación podrá ampliarse de uno a cuatro días. Para los principales sospechosos que cometen delitos sobre la marcha, cometen delitos varias veces o conspiran para cometer delitos, el tiempo de revisión y aprobación puede ampliarse a 30 días. La Fiscalía Popular tomará la decisión de aprobar o desaprobar el arresto dentro de los siete días siguientes a la recepción de la carta de aprobación del órgano de seguridad pública. Si la Fiscalía Popular no aprueba el arresto, el órgano de seguridad pública liberará a la persona inmediatamente después de recibir la notificación y notificará sin demora a la Fiscalía Popular para su ejecución. Aquellos que necesiten continuar la investigación y cumplir las condiciones para la libertad bajo fianza en espera de juicio o vigilancia residencial, serán puestos en libertad bajo fianza en espera de juicio o puestos bajo vigilancia residencial de conformidad con la ley. Si se arresta a un sospechoso de un delito, el abogado contratado puede solicitar la libertad bajo fianza en espera del juicio. El período de investigación y detención por los órganos de seguridad pública después de arrestar a un sospechoso de un delito no excederá de dos meses. Si el caso es complejo y no puede concluirse dentro del plazo, podrá prorrogarse por un mes con la aprobación de la Fiscalía Popular del nivel inmediatamente superior. Cuando los órganos de seguridad pública investigan un caso cerrado, deben asegurarse de que los hechos criminales sean claros y las pruebas confiables y suficientes, redactar un dictamen de la fiscalía y transferirlo junto con los materiales del expediente del caso y las pruebas a la Fiscalía Popular al mismo tiempo. nivel para revisión y decisión. La segunda es la etapa de revisión y enjuiciamiento: cuando la Fiscalía Popular revisa un caso, debe interrogar al sospechoso de un delito y escuchar las opiniones de la víctima, del sospechoso y de la persona encargada por la víctima. A partir de la fecha de transferencia del caso para su revisión y procesamiento, el sospechoso de un delito tiene derecho a confiar un defensor. El acusado en un proceso privado tiene derecho a confiar un defensor en cualquier momento. La Fiscalía Popular, dentro de los tres días siguientes a la fecha de recepción de los materiales del caso transferidos para su revisión y enjuiciamiento, informará al sospechoso de un delito sobre su derecho a confiar un defensor. Dentro de los tres días siguientes a la fecha de aceptación del caso de acusación particular, el Tribunal Popular informará al acusado sobre su derecho a confiar un defensor. A partir de la fecha en que la Fiscalía Popular examina el caso de la acusación, los abogados defensores pueden consultar, extraer y copiar los documentos del litigio y los materiales de evaluación técnica del caso, y pueden reunirse y comunicarse con los sospechosos de delitos bajo custodia. La Fiscalía Popular resolverá en el plazo de un mes sobre los casos transferidos para su procesamiento por los órganos de seguridad pública. Para los casos importantes y complejos, la prórroga podrá ampliarse por medio mes. Si la Fiscalía Popular considera que se han determinado los hechos delictivos del sospechoso, que las pruebas son fiables y suficientes y que la responsabilidad penal debe investigarse de conformidad con la ley, tomará la decisión de procesar y presentar una acusación pública ante el Tribunal Popular. de conformidad con las disposiciones de la jurisdicción procesal. 3. Etapa de juicio: Luego de la revisión del caso para el procesamiento público, el tribunal popular decidirá abrir juicio si los hechos delictivos alegados en la acusación son claros y van acompañados del catálogo de pruebas, lista de testigos y copias o fotografías de las pruebas principales. . Excepto en los casos que involucran secretos de Estado o privacidad personal, los tribunales populares conocen de los casos de primera instancia en público. Dado que el Tribunal Popular acepta un caso, los abogados defensores pueden revisar, extraer y copiar materiales que acusen hechos criminales en el caso, y pueden reunirse y comunicarse con los acusados bajo custodia. En el juicio, el abogado defensor defiende al acusado. Cuando un tribunal popular conozca de un caso de acusación pública, pronunciará sentencia dentro del mes siguiente a la aceptación del caso, y no más de un mes y medio a más tardar. Si concurre alguna de las circunstancias previstas en el artículo 163 de la Ley de Enjuiciamiento Criminal, podrá prorrogarse por un mes más con aprobación o decisión del Tribunal Superior Popular de la provincia, región autónoma o municipio directamente dependiente del Gobierno Central.
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- Desarrollo económico de la ciudad de GuandukouEn 2013, bajo el liderazgo correcto del comité del partido del condado, el gobierno del condado y el comité del partido de la ciudad, el gobierno popular de la ciudad emprendió la actividad de "aprender e implementar el 18º Congreso Nacional". Congreso del Partido Comunista de China y lograr nuevos logros" como línea principal. Implementar seriamente la estrategia de desarrollo y los "Ocho grandes proyectos" de "Ciudad industrial fuerte, ciudad industrial rica, ciudad ecológica hermosa, ciudad con tráfico animado y gente rica". Ciudad". La economía se ha desarrollado rápidamente, varias empresas sociales han logrado avances integrales y la situación social general es armoniosa y estable. Se han cumplido con éxito los objetivos y tareas fijados en la Tercera Sesión de la IX Asamblea Popular Nacional. ——Las operaciones económicas lograron avances al tiempo que superaron dificultades. En 2013, el valor total de la producción industrial y agrícola fue de 520 millones de yuanes, un aumento interanual del 29,04%. Entre ellos, el valor de la producción industrial total fue de 200 millones de yuanes, un aumento interanual del 83,1%; el valor de la producción industrial total por encima del tamaño designado fue de 110 millones de yuanes, un aumento interanual del 63,6%. Los ingresos fiscales totales fueron de 23,511,7 millones de yuanes, un aumento neto de 47,617 millones de yuanes respecto al año anterior. El ingreso neto per cápita de los agricultores fue de 5.449 yuanes, un aumento de 853 yuanes o 22,2 yuanes con respecto al año anterior. La inversión en activos fijos es de 240 millones de yuanes, superando el plan a nivel de condado 140, y la atracción de inversión es de 65.438 83 millones de yuanes, superando el plan a nivel de condado 83 tres grandes empresas, incluidas Hubei Qiaoba Ren, Hubei Tianpeng Animal Husbandry y; La agricultura ecológica con selenio de Hubei Longfu se ha instalado recientemente; se han agregado 445 nuevas entidades de mercado, 80 empresas y 25 cooperativas profesionales rurales. ——La planificación general de la estructura industrial ha logrado resultados notables. Fortalecer el manejo de 32.000 hectáreas de cítricos. Ese año, se desarrollaron recientemente 2.000 acres de sericultura, 6.500 acres de nogales y 2.000 acres de sorgo rojo. Se plantan 1,10000 acres de tabaco curado al humo, con un valor de producción de hojas de tabaco de 364,514 millones de yuanes y unos ingresos fiscales de 8,0193 millones de yuanes, hay 102.700 cerdos y 80.000 en existencia. Se completó la forestación artificial de 1.200 acres, se cerraron laderas para la forestación de 2.000 acres, se replantaron 4.638 acres de bosques ecológicos y se compensaron 207.926 acres de bosques ecológicos de bienestar público. Se promovieron 450 digestores de biogás, 104 calentadores de agua solares y 235 gasificadores de biomasa. ——La construcción de aldeas y ciudades avanza rápidamente en unidad. Para fortalecer la coordinación comunitaria en Shennongxi, se adquirieron 2229 acres de tierra; se demolieron 87 viviendas, se completaron 52 y se construyeron 35; se adquirieron 650 acres de tierra para el hotel Hualong y apartamentos para personas mayores en el nuevo distrito de Jiangbei; se planificaron 38 aldeas centrales; , y 113 hogares violaron las regulaciones en las ciudades comerciales, y 65 hogares fueron castigados. El saneamiento urbano se realiza de forma móvil y la gestión es estandarizada y ordenada. Hexiong completó la tarea de promover el alivio de la pobreza y el desarrollo en toda la aldea, reubicando 75 hogares para aliviar la pobreza, renovando 140 casas rurales en ruinas y renovando 140 casas características. Se completó un proyecto de consolidación territorial con una inversión local de 1,13 millones de yuanes, añadiendo 174,75 acres de tierra cultivada. Se inició el proyecto de consolidación territorial de 1.500 acres en Shuiping, Shuiheping y Chenxiangping. Se llevó a cabo el año de construcción del transporte y se completaron 26 kilómetros de proyectos de tráfico, se ampliaron y reconstruyeron 27 kilómetros de la carretera Guanwan, 16 kilómetros de la carretera del grupo ecológico, 26 kilómetros de la carretera de cemento de Dongpo a Huofeng, 3,4 kilómetros de la carretera asfaltada. desde Shennongxi Qiaotou hasta la ciudad antigua de Dongpo, y caminos de mantenimiento estandarizados de 192 kilómetros. ——A través del trabajo duro, el bienestar de las masas ha mejorado enormemente. Se dio mayor prioridad a la protección de los medios de vida de la población y se completó el ajuste dinámico de las prestaciones de subsistencia urbanas y rurales; se distribuyeron 89,41 millones de yuanes para asistencia temporal, dificultades de vida relacionadas con desastres, sustitución de viviendas, asistencia médica para enfermedades graves y pensiones preferenciales. La reubicación de la casa de asistencia social se completó con éxito y Xiqiaokou fue reconocida como una comunidad de demostración provincial y nacional de prevención y reducción de desastres. La tasa de participación del nuevo seguro médico cooperativo rural es 98,7 y la tasa de participación del nuevo seguro rural es 99. Se crearon más de 300 nuevos puestos de trabajo en ciudades y pueblos, 52 desempleados urbanos fueron recontratados, 103 personas tuvieron dificultades para encontrar empleo y se otorgaron 2,31 millones de yuanes en pequeños préstamos garantizados. Centrándonos en la educación y la gestión docente, 67 estudiantes fueron admitidos al examen de ingreso a la escuela secundaria con fondos públicos, un récord. La tasa de matriculación de niños en edad de escuela primaria en la ciudad ha llegado a 100, la tasa bruta de matriculación de las escuelas intermedias ha llegado a 98, la tasa de deserción de las escuelas intermedias se ha controlado dentro de 2 y se han completado 17.700 yuanes de fondos para el proyecto de reforma delgada; se han construido 18 nuevas salas culturales a nivel de aldea y 58 "librerías agrícolas" a nivel de aldea. Hay 50 "Proyectos de intercambio de recursos culturales nacionales" a nivel de aldea y 16 "Proyectos de acondicionamiento físico de los agricultores" a nivel de aldea. La tasa de natalidad es del 11,18‰, la tasa de fertilidad conforme a las políticas es del 96,71, la proporción de sexos al nacer es del 114 y la tasa natural de crecimiento de la población es del 4,79‰. Preste atención a la implementación de políticas de reasentamiento, la gestión de seguridad del almacenamiento de agua de 175 metros, la gestión de proyectos del fondo de reasentamiento y la formulación e implementación del plan de seguimiento de las Tres Gargantas. Se invirtieron 5,3 millones de yuanes en proyectos de reasentamiento como muelles y senderos peatonales. El fondo de subsidio directo para el reasentamiento fue de 3.164.300 yuanes y el fondo posterior al subsidio fue de 654.380.425.400 yuanes.
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